论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| · 口蹄疫病毒(FMDV)及口蹄疫 | 第11-13页 |
| · 口蹄疫的概况 | 第11页 |
| · FMDV的分子生物学特性 | 第11-12页 |
| · FMDV的抗原性 | 第12-13页 |
| · FMDV的遗传变异 | 第13页 |
| · 大肠杆菌表达系统的优势 | 第13页 |
| · 昆虫杆状病毒表达系统 | 第13-15页 |
| · 概述 | 第14页 |
| · 蛋白质分子的糖基化及其作用 | 第14-15页 |
| · 口蹄疫病毒 ELISA诊断方法研究进展 | 第15页 |
| · 本实验的目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-25页 |
| · 实验材料 | 第17页 |
| · 病毒 | 第17页 |
| · 菌种、质粒载体和细胞 | 第17页 |
| · 酶类和主要试剂 | 第17页 |
| · 仪器和设备 | 第17页 |
| · 实验方法 | 第17-25页 |
| · 引物设计与合成 | 第17-18页 |
| · RNA的提取及反转录 | 第18页 |
| · VP1、VP3和 VP4VP2基因的扩增 | 第18页 |
| · pMD18-T-VP1、pMD18-T-VP3和pMD18-T-VP4VP2的构建 | 第18-20页 |
| · 口蹄疫疫苗株结构基因的克隆 | 第20页 |
| · VP1表达引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| · VP1基因的扩增 | 第21页 |
| · 重组质粒pMD18-T-VP1的构建 | 第21页 |
| · 原核表达质粒pET-30a(+)-VP1的构建 | 第21-22页 |
| · 真核重组质粒pBlueBacHis2A-VP1的构建 | 第22-23页 |
| · pET-30a(+)-VP1在大肠杆菌中诱导表达及检测 | 第23页 |
| · pBlueBacHis2A-VP1在昆虫细胞中的表达及检测 | 第23页 |
| · 间接 ELISA方法的建立 | 第23-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-38页 |
| · VP1、VP3、VP4VP2基因的扩增 | 第25页 |
| · pMD18-T-VP1、pMD18-T-VP3和pMD18-T-VP4VP2的鉴定 | 第25页 |
| · P1的基因序列与其氨基酸序列 | 第25-26页 |
| · 与参考毒株的序列比较 | 第26-28页 |
| · 核苷酸序列比较 | 第26-27页 |
| · 氨基酸序列比较 | 第27-28页 |
| · 与疫苗株的氨基酸异同 | 第28-29页 |
| · 与疫苗株 VP2的氨基酸异同 | 第28页 |
| · 与疫苗株 VP3的氨基酸异同 | 第28-29页 |
| · 与参考毒株绘制系统进化树 | 第29-32页 |
| · 型进化树 | 第29-30页 |
| · 拓扑型进化树 | 第30-32页 |
| · 重组质粒pMD18-T-VP1的鉴定 | 第32页 |
| · 原核表达质粒pET-30a(+)-VP1的鉴定 | 第32页 |
| · 真核重组质粒pBlueBacHis2A-VP1的鉴定 | 第32-33页 |
| · 原核表达质粒pET-30a(+)-VP1在大肠杆菌中的表达 | 第33页 |
| · SDS-PAGE结果 | 第33页 |
| · Western blotting与dot-ELISA分析结果 | 第33页 |
| · 真核重组质粒pBlueBacHis2A-VP1在昆虫细胞中的表达 | 第33-36页 |
| · 质粒纯化 | 第34页 |
| · 重组病毒的鉴定结果 | 第34页 |
| · 病毒滴度的测定结果 | 第34页 |
| · 表达 SDS-PAGE结果 | 第34页 |
| 3.11.S Western blotting与dot-ELISA分析结果 | 第34-36页 |
| · 间接 ELISA方法的建立 | 第36-38页 |
| · 抗原的制备 | 第36页 |
| · 间接 ELISA试验最佳条件选择 | 第36页 |
| · 间接 ELISA判定标准的确定 | 第36页 |
| · 阻断试验 | 第36-37页 |
| · 敏感性及重复性试验 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| · HLJOC12/03所属型与拓扑型 | 第38页 |
| · HLJOC12/03的结构基因及其编码的结构蛋白特点 | 第38页 |
| · HLJOC12/03与疫苗株 VP1的抗原位点 | 第38-39页 |
| · VP1基因表达和抗原性鉴定 | 第39-40页 |
| · 间接 ELISA方法的建立 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-52页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第52页 |
