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小地老虎几丁质代谢酶基因的克隆及分子特性研究

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小地老虎几丁质代谢酶基因的克隆及分子特性研究
论文目录
 
摘要第12-14页
ABSTRACT第14-16页
1 引言第16-25页
  · 几丁质第16-17页
    · 几丁质的结构第16页
    · 昆虫中几丁质的发现第16-17页
  · 几丁质代谢相关酶第17-18页
    · 几丁质合成及几丁质合成酶第17页
    · 几丁质降解及几丁质降解酶第17-18页
  · 应用及前景第18-19页
  · 国内外研究现状第19-23页
    · 昆虫几丁质代谢相关酶cDNA 的克隆第19-21页
    · 昆虫几丁质代谢相关酶基因在虫体内的表达第21-22页
    · 昆虫几丁质代谢相关酶基因的体外表达第22页
    · 昆虫几丁质代谢相关酶的基因的拷贝数研究第22-23页
  · 昆虫几丁质代谢相关酶的研究展望第23页
  · 小地老虎介绍第23-24页
  · 本论文研究的目的和意义第24页
    · 研究目的第24页
    · 研究意义第24页
  · 本研究课题的来源及主要研究内容第24-25页
2 材料与方法第25-42页
  · 材料第25-26页
    · 菌株与质粒第25页
    · 分子生物学用酶及试剂盒和各种试剂第25页
    · 培养基第25页
    · 仪器设备第25页
    · 昆虫来源第25-26页
  · 研究方法第26-34页
    · 总RNA 提取第26-27页
      · 提取过程第26页
      · 所抽提的RNA 的质量检测第26-27页
      · RNA 的纯化第27页
    · 利用RT-PCR 扩增保守区之间的cDNA 序列第27-29页
      · 第一链cDNA 的合成第27-28页
      · PCR 反应第28页
      · 琼脂糖凝胶电泳第28-29页
      · DNA 回收第29页
      · 连接反应第29页
      · JM109 感受态细胞制备第29页
      · E. coli 的转化第29页
    · RACE 引物设计第29-31页
      · 几丁质合成酶RACE 引物设计第29-30页
      · 几丁质酶RACE 引物设计第30页
      · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶RACE 引物设计第30-31页
    · 3′-RACE 的实验步骤第31页
    · 5′-RACE 的实验步骤第31-34页
      · 去磷酸化处理第31页
      · 去帽子反应第31-32页
      · 5′-RACE Adaptor 的连接第32页
      · 反转录反应第32-33页
      · Outer PCR 反应第33页
      · Inner PCR 反应第33-34页
      · 以下步骤与RT-PCR 扩增保守区之间的cDNA 序列的步骤相同第34页
    · 全长cDNA 的获取及其序列分析第34页
  · cDNA 序列分析第34-35页
    · 利用Blast 软件进行序列相似性检索第34页
    · 分子质量、碱基组成、碱基分布第34-35页
    · 全长cDNA 可读框架分析第35页
    · 对ORF 进行限制性酶切分析第35页
    · 核酸序列对齐分析的功能预测第35页
      · NCBI/Blast 软件的核酸序列同源性分析第35页
      · 核酸序列之间的多重比对分析及进化分析第35页
  · 蛋白质基本性质分析第35页
    · 疏水性分析第35页
    · 信号肽分析第35页
  · 蛋白质功能预测第35-36页
    · 蛋白质序列同源性分析及蛋白质功能预测第35-36页
    · 结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测第36页
  · 蛋白质结构预测第36页
    · 蛋白质二级结构预测第36页
    · 蛋白质三级结构预测第36页
  · 不同生长发育时期几丁质代谢酶基因表达水平研究第36-37页
    · 总RNA 的提取第37页
    · cDNA 第一链的合成第37页
    · 肌动蛋白全长基因的克隆与表达引物设计第37页
      · 利用RT-PCR 扩增保守区之间的cDNA 序列第37页
  · 几丁质酶基因在大肠杆菌中的表达研究第37-42页
    · 几丁质酶基因cDNA 序列ORF 的PCR 反应第37-38页
    · PCR 产物酶切反应第38页
    · E.coli 质粒DNA 提取和酶切第38页
    · 大肠杆菌表达载体构建第38页
    · 几丁质酶基因在大肠杆菌中诱导表达第38-39页
    · SDS-PAGE 电泳第39-42页
3 结果与分析第42-75页
  · 几丁质代谢酶RNA 的提取第42页
    · RNA 完整性的检测第42页
    · 纯度及产量检测第42页
  · RT-PCR 得到几丁质代谢酶的基因特异性片段及序列分析第42-44页
    · 几丁质合成酶的基因特异性片段及序列分析第42-43页
    · 几丁质酶的基因特异性片段及序列分析第43页
    · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶的基因特异性片段及序列分析第43-44页
  · 基因cDNA 序列的3’-RACE 结果第44-45页
    · 几丁质酶基因cDNA 序列的3’-RACE 结果第44页
    · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA 序列的3’-RACE 结果第44-45页
  · 几丁质酶基因cDNA 序列的5’-RACE 结果第45页
  · 基因cDNA 序列的获得第45-50页
    · 几丁质合成酶基因cDNA 序列和氨基酸序列第45-46页
    · 几丁质酶基因全长cDNA 序列和氨基酸序列第46-48页
    · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA 序列和氨基酸序列第48-50页
  · 三种几丁质代谢酶基因特征第50-54页
    · 碱基序列组成分析第50-52页
    · 氨基酸序列组成分析第52-53页
    · 信号肽分析第53-54页
    · 推导的氨基酸序列二级结构预测第54页
  · 氨基酸结构域预测第54-58页
    · 几丁质合成酶氨基酸结构域预测第54-55页
    · 几丁质酶氨基酸结构域预测第55-57页
    · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶氨基酸结构域预测第57-58页
  · 几丁质代谢酶氨基酸的疏水性分析第58-60页
  · 序列同源性比较第60-71页
    · 合成酶基因与其它几种鳞翅目昆虫的相应片段同源性比较第60-61页
    · 几丁质酶基因与其它几种鳞翅目昆虫的同源性比较第61-64页
    · β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶基因与其它几种鳞翅目昆虫相应片段的同源性比较第64-66页
    · 聚类分析第66-71页
      · 克隆的合成酶基因与已发表的昆虫合成酶基因的聚类分析第66-68页
      · 几丁质酶基因与已发表的昆虫几丁质酶基因的聚类分析第68-71页
      · 克隆的β-氮-乙酰葡糖胺糖苷酶基因与已发表的其它几种鳞翅目昆虫相应片段的聚类分析第71页
  · 小地老虎几丁质代谢酶基因表达水平研究第71-74页
    · 肌动蛋白全长基因序列的获得与表达引物的设计第71-73页
    · 不同发育时期的表达水平第73-74页
  · 几丁质酶基因在大肠杆菌中的表达第74-75页
    · 大肠杆菌重组表达载体的构建和鉴定第74页
    · 几丁质酶基因在大肠杆菌中的融合表达第74-75页
4 讨论第75-76页
  · 几丁质代谢酶基因拷贝数的探讨第75页
  · 利用肌动蛋白进行RT-PCR 定性研究的探讨第75页
  · 几丁质降解酶表达系统的选择第75-76页
5 结论第76-77页
致谢第77-78页
参考文献第78-81页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第81页

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