论文目录 | |
| 摘要 | 第10-12
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| Abstract | 第12-14
页 |
| 1 引言 | 第14-27
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| · 芽胞 | 第14-23
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| · 芽胞形成的起始 | 第15-17
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| · 细胞不对称分裂和前芽胞的形成 | 第17
页 |
| · 基因的区室化表达和芽胞内吞 | 第17-22
页 |
| · 芽胞的成熟 | 第22
页 |
| · 芽胞的萌发 | 第22-23
页 |
| · BT 杀虫晶体蛋白 | 第23-26
页 |
| · Bt 杀虫晶体蛋白基因 | 第23
页 |
| · 杀虫晶体蛋白基因的表达与调控 | 第23-26
页 |
| · 立题依据和目的意义 | 第26-27
页 |
| 2 材料与方法 | 第27-49
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| · 实验材料 | 第27-32
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| · 菌株与质粒 | 第27-29
页 |
| · 培养基与抗生素 | 第29
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| · 引物名称及序列 | 第29-30
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| · 酶与生化试剂 | 第30
页 |
| · 常用溶液与缓冲液 | 第30-32
页 |
| · 仪器设备 | 第32
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| · 实验方法 | 第32-38
页 |
| · 模板的制备 | 第32-33
页 |
| · PCR 扩增 | 第33
页 |
| · 酶切反应 | 第33-34
页 |
| · E.coli 质粒DNA 提取 | 第34
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳 | 第34
页 |
| · 目的DNA 的回收 | 第34
页 |
| · DNA 片段的连接 | 第34-35
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| · E.coli 热击感受态细胞的制备 | 第35
页 |
| · 质粒热击转化E.coli | 第35
页 |
| · PCR 扩增片断的克隆与序列分析 | 第35
页 |
| · E.coli 电击感受态细胞的制备 | 第35
页 |
| · E.coli 电击转化方法 | 第35-36
页 |
| · Southern blotting 验证 | 第36-38
页 |
| · 技术路线 | 第38-49
页 |
| · Bt 总DNA 的提取 | 第38-39
页 |
| · sigE 和sigK 基因的克隆及测序 | 第39
页 |
| · sigE 和sigK 基因敲除载体的构建 | 第39-41
页 |
| · 敲除载体与Bt 基因组间的同源重组 | 第41-42
页 |
| · 突变株的鉴定 | 第42-43
页 |
| · 突变株的形态观察 | 第43
页 |
| · 突变株的生长情况分析 | 第43
页 |
| · 突变株产生杀虫蛋白晶体能力分析 | 第43
页 |
| · 以lacZ 为报告基因的基因转录分析 | 第43-45
页 |
| · 突变株中外源cry1Ac 基因的表达情况分析 | 第45-46
页 |
| · 恢复株的构建 | 第46
页 |
| · Bt G03 spoⅢAE 基因突变株中sigE 基因转录分析 | 第46
页 |
| · Bs 168 spoⅢAE 基因突变株的基因转录分析 | 第46-49
页 |
| 3 结果与分析 | 第49-74
页 |
| · SIGE 和SIGK 基因的克隆与序列分析 | 第49-55
页 |
| · sigE 基因的克隆与序列分析 | 第49-52
页 |
| · sigK 基因的克隆与序列分析 | 第52-55
页 |
| · 敲除载体的构建与鉴定 | 第55-57
页 |
| · 敲除载体pMADE 的构建与鉴定 | 第55-56
页 |
| · 敲除载体pRNK 的构建与鉴定 | 第56-57
页 |
| · 缺失突变株的获得 | 第57-59
页 |
| · 突变株的PCR 鉴定 | 第57-58
页 |
| · 突变株的southern blotting 验证 | 第58-59
页 |
| · 突变株的生长特性 | 第59-60
页 |
| · 突变株的形态观察 | 第60
页 |
| · 突变株产杀虫蛋白能力的分析 | 第60-61
页 |
| · 以LACZ 为报告基因的转录分析 | 第61-64
页 |
| · 突变株中cry1Aa 启动子指导的β-半乳糖苷酶的活性分析 | 第61
页 |
| · 突变株中spoⅡD 启动子指导的β-半乳糖苷酶的活性分析 | 第61-62
页 |
| · 突变株中sigE 启动子指导的β-半乳糖苷酶活性分析 | 第62-64
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| · 突变株中外源CRY1AC 基因的表达分析 | 第64-66
页 |
| · 突变株中外源cry1Ac 基因的表达分析 | 第64-65
页 |
| · 突变株中Cry1Ac-GFP 融合蛋白的表达分析 | 第65-66
页 |
| · SIGE 和SIGK 恢复株的构建 | 第66-69
页 |
| · sigE 恢复株的构建 | 第66-68
页 |
| · sigK 恢复株的构建 | 第68-69
页 |
| · BT G03 SPOⅢAE 基因突变株中SIGE 基因转录分析 | 第69-70
页 |
| · BS 168 SPOⅢAE 基因突变株的基因转录分析 | 第70-74
页 |
| · Bs 168 spoⅢAE 基因敲除载体pMAD3AE 的构建 | 第70-71
页 |
| · Bs 168 spoⅢAE 突变株的获得 | 第71
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| · Bs 168 spoⅢAE 基因缺失突变株中spoⅡD 和sigE 的转录分析 | 第71-74
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| 4 讨论 | 第74-76
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| 5 结论 | 第76-77
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| 致谢 | 第77-78
页 |
| 参考文献 | 第78-87
页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第87页 |
