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大肠杆菌生物合成苯酚及酶法合成高谷氨酸
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大肠杆菌生物合成苯酚及酶法合成高谷氨酸
论文目录
学位论文数据集
第1-4页
摘要
第4-6页
Abstract
第6-14页
第一章 绪论
第14-20页
1.1 合成生物学
第14页
1.2 莽草酸途径的改造
第14-15页
1.3 多酶偶联体系
第15-17页
1.3.1 NAD(P)H的再生
第16-17页
1.3.2 ATP的再生
第17页
1.3.3 糖核苷酸再生
第17页
1.4 苯酚的生产方式和用途
第17-18页
1.5 高谷氨酸的生产方式和用途
第18页
1.6 立题的目的和意义
第18页
1.7 主要研究内容
第18-20页
第二章 实验方法
第20-28页
2.1 实验仪器
第20页
2.2 试剂
第20页
2.3 培养基
第20页
2.4 质粒和基因组的提取
第20-21页
2.4.1 质粒的提取
第20-21页
2.4.2 基因组的提取
第21页
2.5 PCR扩增
第21-22页
2.6 目的基因的纯化和回收
第22-23页
2.7 酶切
第23页
2.8 琼脂糖凝胶电泳
第23-24页
2.9 连接
第24页
2.10 转化
第24-25页
2.10.1 化学转化
第24页
2.10.2 电转化
第24-25页
2.11 目的蛋白的表达和纯化
第25-26页
2.11.1 目的蛋白表达
第25页
2.11.2 破碎细胞
第25页
2.11.3 蛋白纯化
第25-26页
2.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳
第26-27页
2.13 OD600测定细胞浓度
第27页
2.14 蛋白浓度的测定
第27-28页
第三章 莽草酸途径生物合成苯酚
第28-44页
3.1 前言
第28页
3.2 实验材料
第28-30页
3.2.1 实验菌株
第28-29页
3.2.2 实验质粒及引物
第29-30页
3.3 实验方法
第30-37页
3.3.1 质粒构建
第30-33页
3.3.2 BDC酶活测试
第33-34页
3.3.3 HPLC检测
第34-35页
3.3.4 苯酚的毒性实验
第35页
3.3.5 体外添加实验
第35页
3.3.6 从头合成实验
第35页
3.3.7 模块优化
第35-36页
3.3.8 发酵菌株优化
第36页
3.3.9 发酵条件优化
第36-37页
3.4 实验结果
第37-41页
3.4.1 苯酚毒性实验结果
第37页
3.4.2 添加水杨酸生产苯酚
第37-38页
3.4.3 从头合成苯酚及模块优化结果
第38-39页
3.4.4 菌株优化结果
第39-40页
3.4.5 发酵条件优化结果
第40-41页
3.5 讨论
第41-44页
第四章 双酶偶联生物制备高谷氨酸
第44-78页
4.1 前言
第44页
4.2 实验材料
第44-45页
4.2.1 实验菌株
第44页
4.2.2 实验质粒及引物
第44-45页
4.3 实验方法
第45-67页
4.3.1 转氨酶的筛选
第46页
4.3.2 重组质粒的构建
第46-59页
4.3.3 反应中酶的体外活性测定
第59-63页
4.3.4 计算机模拟转氨酶和底物的结合模型
第63-64页
4.3.5 重叠延伸PCR定点突变
第64-66页
4.3.6 HPLC检测
第66-67页
4.4 实验结果
第67-77页
4.4.1 TiPDH基因的定点突变结果
第67-69页
4.4.2 modTiPDH对天然底物的作用
第69-71页
4.4.3 酶学性质的研究
第71-73页
4.4.4 添加保护剂对酶稳定性影响
第73-75页
4.4.5 辅酶循环体系的优化结果
第75-77页
4.5 讨论
第77-78页
第五章 结论和展望
第78-80页
参考文献
第80-84页
附录1
第84-86页
附录2
第86-88页
致谢
第88-90页
研究成果及发表的学术论文
第90-92页
作者和导师简介
第92-93页
附件
第93-94页
本篇论文共
94
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