论文目录 | |
| 学位论文数据集 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 链霉菌属及其自身抗生素的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 氨基糖苷类抗生素概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 氨基糖苷类抗生素作用机制 | 第17页 |
| 1.2.2 氨基糖苷类抗生素结构及分类 | 第17-18页 |
| 1.3 2-DOS类抗生素的耐药性及毒性问题 | 第18-20页 |
| 1.3.1 耐药性问题 | 第18-19页 |
| 1.3.2 毒性及副作用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 2-DOS类AGAs的化学结构改造 | 第20页 |
| 1.4 2-DOS氨基糖苷类抗生素的生物合成途径研究 | 第20-27页 |
| 1.4.1 2-DOS类AGAs合成基因的特点 | 第21页 |
| 1.4.2 2-DOS氨基糖苷抗生素共同中间体的合成途径 | 第21-24页 |
| 1.4.3 假三糖的合成途径 | 第24-25页 |
| 1.4.4 新霉素的生物合成途径 | 第25-27页 |
| 1.5 卡那霉素概述 | 第27-33页 |
| 1.5.1 卡那霉素生物合成途径 | 第28-31页 |
| 1.5.2 卡那霉素B简介 | 第31页 |
| 1.5.3 传统提高卡那霉素B产量的方法 | 第31-32页 |
| 1.5.4 利用基因工程方法提高微生物抗生素产量 | 第32-33页 |
| 1.6 论文工作的意义及创新 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.3 实验所用培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.4 实验所用试剂、仪器、相关酶 | 第36页 |
| 2.1.5 缓冲液 | 第36页 |
| 2.1.6 实验所用引物 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-48页 |
| 2.2.1 E.coli质粒小量提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 细菌总DNA小量提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第39-41页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳和DNA片段胶回收 | 第41-42页 |
| 2.2.5 DNA酶切及去磷酸化 | 第42-43页 |
| 2.2.6 DNA柱回收及T4酶连接 | 第43-44页 |
| 2.2.7 大肠杆菌ET12567 (PUZ8002)感受态制备 | 第44页 |
| 2.2.8 DNA转化大肠杆菌 | 第44-45页 |
| 2.2.9 接合转移实验 | 第45-46页 |
| 2.2.10 野生卡那链霉菌及工程变菌的发酵 | 第46页 |
| 2.2.11 发酵液纯化处理 | 第46页 |
| 2.2.12 发酵液产物检测 | 第46-48页 |
| 第三章 卡那链霉菌接合转移体系的建立 | 第48-54页 |
| 3.1 接合转移培养基 | 第48-49页 |
| 3.2 接合转移的抗生素 | 第49-50页 |
| 3.3 单、双交换菌株的筛选 | 第50页 |
| 3.4 接合转移原始亲株的选择 | 第50-54页 |
| 第四章 kanJ敲除变株的构建及产物分析 | 第54-70页 |
| 4.1 kanJ敲除质粒的构建 | 第54-62页 |
| 4.1.1 pSET152质粒的改造 | 第54-56页 |
| 4.1.2 两步连接法构建质粒pZHJ1 | 第56-62页 |
| 4.2 pZHJ1的电转化及接合转移 | 第62-65页 |
| 4.3 kanJ敲除变株的发酵及液相检测 | 第65-67页 |
| 4.3.1 卡那霉素A和B标准曲线 | 第65-66页 |
| 4.3.2 J-1发酵产物浓度检测 | 第66-67页 |
| 4.4 本章小结 | 第67-70页 |
| 第五章 neo8基因在卡那链霉菌中的表达及产物分析 | 第70-78页 |
| 5.1 neo8表达变株的构建 | 第70-73页 |
| 5.2 pZHJ2的电转化及结合转移 | 第73-75页 |
| 5.3 neo8表达接合子J-2A和J-2B发酵及液相检测 | 第75-77页 |
| 5.3.1 卡那霉素A和卡那霉素B标准曲线 | 第76-77页 |
| 5.3.2 J-2A和J-2B液相检测结果 | 第77页 |
| 5.4 结果讨论 | 第77-78页 |
| 第六章 neo8-kanF替换变株的构建 | 第78-90页 |
| 6.1 neo8-kanF替换质粒的构建 | 第79-87页 |
| 6.1.1 pZHJ-B质粒的构建 | 第80-82页 |
| 6.1.2 pKC1139-kanF右臂质粒的构建 | 第82-84页 |
| 6.1.3 kanF左臂和ermE抗性基因与质粒pZHJ301的连接 | 第84-85页 |
| 6.1.4 将neo8片段和PermE~*与neo8融合片段插入质粒pZHJ302 | 第85-87页 |
| 6.2 质粒pZHJ3和pZHJ4的电转化及接合转移 | 第87-88页 |
| 6.3 本章小节 | 第88-90页 |
| 第七章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 7.1 结论 | 第90-91页 |
| 7.2 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 附录 | 第96-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第104-106页 |
| 作者及导师简介 | 第106-107页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第107-108页 |
