论文目录 | |
摘要 | 第1-4页 |
abstract | 第4-7页 |
第1章 前言 | 第7-23页 |
1.1 阿兹海默病的研究进展 | 第7-11页 |
1.1.1 阿兹海默病简介 | 第7页 |
1.1.2 阿兹海默病与tau蛋白过度磷酸化 | 第7-9页 |
1.1.3 阿兹海默病与淀粉样蛋白的积累 | 第9-10页 |
1.1.4 阿兹海默病的诊断与治疗 | 第10-11页 |
1.2 细胞自噬 | 第11-17页 |
1.2.1 细胞自噬简介 | 第11-12页 |
1.2.2 细胞自噬的调控通路 | 第12-14页 |
1.2.3 溶酶体酶Cathepsins | 第14-15页 |
1.2.4 细胞自噬的功能 | 第15-16页 |
1.2.5 细胞自噬与阿兹海默 | 第16-17页 |
1.3 miRNA的研究进展 | 第17-23页 |
1.3.1 miRNA的简介 | 第17页 |
1.3.2 miRNA的加工 | 第17-19页 |
1.3.3 miRNA的调控机制 | 第19-20页 |
1.3.4 miRNA与疾病 | 第20-21页 |
1.3.5 miR-34a | 第21-23页 |
第2章 材料与方法 | 第23-35页 |
2.1 实验试剂、材料与实验器材 | 第23-24页 |
2.1.1 动物实验模型 | 第23页 |
2.1.2 细胞实验相关试剂与耗材 | 第23页 |
2.1.3 分子实验相关试剂与耗材 | 第23-24页 |
2.1.4 实验仪器与实验设备 | 第24页 |
2.2 实验方法 | 第24-33页 |
2.2.1 细胞培养及细胞转染 | 第24-25页 |
2.2.2 细胞中RNA的抽提方法 | 第25页 |
2.2.3 RNA去基因组污染 | 第25-26页 |
2.2.4 将RNA反转得到cDNA | 第26页 |
2.2.5 Q-PCR实验方法 | 第26-27页 |
2.2.6 用TaqMan探针检测miRNA | 第27-28页 |
2.2.7 Western Blotting实验 | 第28-30页 |
2.2.8 构建靶点验证用双荧光报告载体 | 第30-32页 |
2.2.9 构建靶点验证用突变型双荧光报告载体 | 第32-33页 |
2.3 构建U251-GFP-LC3细胞系 | 第33-34页 |
2.4 构建稳定表达miR-34a的U251细胞系 | 第34-35页 |
第3章 实验结果 | 第35-52页 |
3.1 转基因小鼠大脑组织中miR-34a表达上调 | 第35-36页 |
3.2 流式细胞仪检测miR-34a对U251细胞内Aβ42 降解的影响 | 第36-39页 |
3.3 Western Blotting检测miR-34a对自噬的影响 | 第39-41页 |
3.3.1 U251细胞上瞬时转染miR-34a检测其对自噬的影响 | 第39-40页 |
3.3.2 构建U251稳定表达miR-34a细胞系进行Western Blotting检测 | 第40-41页 |
3.4 荧光共聚焦显微镜观察转染miR-34a对U251细胞自噬产生的影响 | 第41-43页 |
3.5 miR-34a抑制溶酶体酶CathepsinB、CathepsinD | 第43-52页 |
3.5.1 用生物信息学方法预测miR-34a抑制自噬溶酶体的靶点蛋白 | 第43-44页 |
3.5.2 用Q-PCR和Western Blotting验证miR-34a对Cathepsins的抑制 | 第44-46页 |
3.5.3 抑制U251细胞内源miR-34a反向验证对Cathepsins的抑制 | 第46-48页 |
3.5.4 检测miR-34a对Cathepsins活性的影响 | 第48页 |
3.5.5 构建双荧光报告载体来验证miR-34a在Cathepsins上的靶点 | 第48-51页 |
3.5.6 小结 | 第51-52页 |
第4章 总结与展望 | 第52-55页 |
4.1 实验总结 | 第52-53页 |
4.2 讨论展望 | 第53-55页 |
参考文献 | 第55-63页 |
致谢 | 第63-65页 |
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第65页 |