论文目录 | |
| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 综述 病原微生物未知基因功能的研究策略 | 第10-18页 |
| 1 新基因生物信息学分析 | 第10-11页 |
| 1.1 新基因序列分析 | 第10-11页 |
| 1.2 新基因编码产物的分析 | 第11页 |
| 2 新基因功能获得与失活 | 第11-12页 |
| 2.1 新基因功能获得方法 | 第11页 |
| 2.2 新基因功能失活方法 | 第11-12页 |
| 3 新基因体内表达水平的检测 | 第12-13页 |
| 3.1 mRNA表达水平的变化 | 第12-13页 |
| 3.2 蛋白表达水平的变化 | 第13页 |
| 4 新基因编码产物与已知蛋白相互作用研究策略 | 第13-14页 |
| 4.1 GST pull-down技术 | 第13-14页 |
| 4.2 免疫共沉淀技术 | 第14页 |
| 5 展望 | 第14-15页 |
| 参考文献 | 第15-18页 |
| 第一章 空肠弯曲菌cj0371突变株生物学特性及毒力分析 | 第18-42页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要仪器 | 第19页 |
| 1.4 实验动物与细胞 | 第19-20页 |
| 1.5 引物设计 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-29页 |
| 2.1 空肠弯曲菌cj0371基因的功能亚定位 | 第20-24页 |
| 2.2 空肠弯曲菌cj0371突变株生物学特性分析 | 第24-25页 |
| 2.3 cj0371突变株、野生株对Caco-2细胞的黏附侵袭分析 | 第25页 |
| 2.4 cj0371突变株、野生株在仔兔肠道的定殖分析 | 第25页 |
| 2.5 cj0371突变株、野生株刺激细胞及炎性因子的测定 | 第25-27页 |
| 2.6 空肠弯曲菌Cj0371蛋白免疫原性初步鉴定 | 第27-29页 |
| 3 结果 | 第29-37页 |
| 3.1 cj0371质粒(pRY107-pmetk-cj0371-egfp)回复株构建及鉴定 | 第29-31页 |
| 3.2 空肠弯曲菌cj0371突变株生物学分析 | 第31-33页 |
| 3.3 cj0371突变株、野生株对Caco-2细胞的黏附侵袭力分析 | 第33页 |
| 3.4 cj0371突变株、野生株在仔兔肠道的定殖力分析 | 第33-34页 |
| 3.5 cj0371突变株、野生株刺激HD11细胞炎性因子的测定 | 第34页 |
| 3.6 空肠弯曲菌Cj0371蛋白免疫原性初步鉴定 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 第二章 cj0371基因在空肠弯曲菌趋化通路中的作用研究 | 第42-67页 |
| 1 材料 | 第42-45页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第42-43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 1.4 质谱分析 | 第44页 |
| 1.5 引物设计 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-53页 |
| 2.1 免疫共沉淀筛选与Cj0371相互作用的蛋白 | 第45-46页 |
| 2.2 cj0371突变株趋化基因和鞭毛基因的表达水平的检测 | 第46-48页 |
| 2.3 空肠弯曲菌趋化蛋白的原核表达 | 第48-50页 |
| 2.4 应用GST pull- down技术验证蛋白间的相互作用 | 第50-52页 |
| 2.5 酶连分光光度分析法检测CheA蛋白ATPase活性 | 第52-53页 |
| 2.6 Cj0371蛋白与CheV蛋白的相互作用结构域解析 | 第53页 |
| 2.7 数据统计 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-63页 |
| 3.1 免疫共沉淀筛选与Cj0371相互作用的蛋白 | 第53-56页 |
| 3.2 cj0371突变株趋化基因和鞭毛基因表达水平的检测 | 第56-57页 |
| 3.3 空肠弯曲菌趋化蛋白的原核表达 | 第57-59页 |
| 3.4 Western-blot分析趋化蛋白与Cj0371蛋白的GST pull-down实验结果 | 第59-60页 |
| 3.5 酶连法检测CheA蛋白ATPase活性 | 第60-61页 |
| 3.6 Cj0371蛋白与CheV蛋白的相互作用结构域解析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文目录 | 第68-69页 |
