论文目录 | |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩写与符号 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 油菜的重要地位 | 第13-14页 |
| 1.2 植物抗病防御机制 | 第14-20页 |
| 1.2.1 植物的结构性防御 | 第15页 |
| 1.2.2 植物的诱导抗性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 植物抗病防卫途径 | 第16-20页 |
| 1.3 NPR1研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 NPR1基因的发现 | 第20-21页 |
| 1.3.2 NPR1在植物防御非生物胁迫中的作用 | 第21页 |
| 1.3.3 NPR1在植物防御病原菌侵染中的作用 | 第21-23页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第23页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第23-26页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第23-25页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 甘蓝型油菜BnNPR1基因的克隆和序列分析 | 第26-34页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-28页 |
| 2.2.1 BnNPR1序列的克隆与胶回收 | 第27页 |
| 2.2.2 连接与转化大肠杆菌 | 第27页 |
| 2.2.3 质粒提取及其阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| 2.2.4 序列分析 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 BnNPR1基因的克隆及其序列分析 | 第28-31页 |
| 2.3.2 BnNPR1理化性质分析 | 第31-32页 |
| 2.3.3 BnNPR1亚细胞定位预测 | 第32页 |
| 2.4 讨论和小结 | 第32-34页 |
| 第三章 甘蓝型油菜BnNPR1对逆境胁迫的响应分析 | 第34-41页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 样品处理 | 第34-35页 |
| 3.2.2 样品采集 | 第35页 |
| 3.2.3 油菜总RNA提取和cDNA合成 | 第35页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第35-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 BnNPR1对菌核病生物胁迫的响应 | 第37-38页 |
| 3.3.2 BnNPR1对各种非生物胁迫因子的表达响应 | 第38-39页 |
| 3.3.3 BnNPR1对各种抗逆相关激素的响应 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第40-41页 |
| 第四章 BnNPR1的组织特异性表达及其蛋白的亚细胞定位 | 第41-49页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 4.1.2 菌种与载体 | 第42页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.4 样品采集 | 第42页 |
| 4.1.5 基本溶液的配制 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第43页 |
| 4.2.2 亚细胞定位载体的构建 | 第43-45页 |
| 4.2.3 烟草叶片的瞬时转化 | 第45页 |
| 4.2.4 荧光共聚焦显微镜(Leica TCS SP5)的观察 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 4.3.1 BnNPR1的组织特异性表达 | 第45-46页 |
| 4.3.2 BnNPR1在烟草中的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第47-49页 |
| 第五章 BnNPR1过量表达和抑制表达油菜转基因株系的创建及其菌核病抗性分析 | 第49-61页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第49页 |
| 5.2 方法 | 第49-53页 |
| 5.2.1 植物表达载体的构建 | 第49页 |
| 5.2.2 植物转化载体的构建 | 第49-51页 |
| 5.2.3 农杆菌重组载体的制备 | 第51-52页 |
| 5.2.4 油菜的遗传转化 | 第52页 |
| 5.2.5 抗生素筛选转化植株 | 第52页 |
| 5.2.6 转化植株的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 5.2.7 转化植株的qRT-PCR鉴定 | 第53页 |
| 5.2.8 核盘菌侵染油菜转化株叶片 | 第53页 |
| 5.3 结果与分析 | 第53-60页 |
| 5.3.1 BnNPR1过量表达转化植株的PCR筛选鉴定 | 第53-54页 |
| 5.3.2 BnNPR1过表达植株的qRT-PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 5.3.3 BnNPR1抑制表达转化植株的PCR筛选鉴定 | 第55-56页 |
| 5.3.4 抑制表达转化株的qRT-PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 5.3.5 BnNPR1-RNAi转基因株系降低甘蓝型油菜对菌核病的抗性 | 第57-60页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第60-61页 |
| 第六章 BnNPR1防卫反应表达分析 | 第61-70页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第62页 |
| 6.2 方法 | 第62-63页 |
| 6.2.1 DAB组织染色 | 第62页 |
| 6.2.2 qRT-PCR表达分析 | 第62-63页 |
| 6.3 结果与分析 | 第63-67页 |
| 6.3.1 B.napus与S.sclerotiorum互作中，BnNPR1的抑制表达对H_2O_2积累的影响 | 第63-64页 |
| 6.3.2 B.napus与S.sclerotiorum互作中，BnNPR1的抑制表达对SA、JA和ET信号分子介导的防卫反应的影响 | 第64-67页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第67-70页 |
| 第七章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 7.1 工作总结 | 第70页 |
| 7.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 在学期间发表论文 | 第83页 |
