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苹果几丁质酶基因的克隆与功能分析

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苹果几丁质酶基因的克隆与功能分析
论文目录
 
摘要第10-11页
Abstract第11-12页
1 前言第12-21页
  1.1 苹果病害第12-13页
    1.1.1 病害类型第12页
    1.1.2 我国苹果病害现状第12-13页
    1.1.3 苹果真菌病害防治第13页
  1.2 几丁质第13-14页
  1.3 几丁质酶第14-18页
    1.3.1 几丁质酶的特性第14页
    1.3.2 几丁质酶的结构及其功能第14-15页
    1.3.3 几丁质酶的分类第15-17页
    1.3.4 几丁质酶生物学作用第17-18页
  1.4 植物几丁质酶基因第18-20页
    1.4.1 植物几丁质酶基因结构第18-19页
    1.4.2 植物几丁质酶基因工程研究进展第19-20页
  1.5 本研究目的与意义第20-21页
2 材料与方法第21-34页
  2.1 试验与材料第21-22页
    2.1.1 植物材料第21页
    2.1.2 主要试剂和试验仪器第21页
    2.1.3 主要培养基第21-22页
  2.2 试验方法第22-26页
    2.2.1 核酸提取与检测第22-23页
    2.2.2 引物设计第23-24页
    2.2.3 RNA的反转录第24页
    2.2.4 基因克隆第24-25页
    2.2.5 目的片段的回收与重组连接第25页
    2.2.6 重组质粒DNA的转化、鉴定及测序第25-26页
    2.2.7 序列分析第26页
  2.3 过表达载体的构建第26-28页
    2.3.1 质粒提取第26-27页
    2.3.2 目的片段与pRI 101 AN载体连接第27页
    2.3.3 重组质粒DNA的转化、鉴定及测序第27-28页
  2.4 农杆菌介导转化拟南芥和苹果第28-31页
    2.4.1 农杆菌感受态的制备第28-29页
    2.4.2 质粒转化农杆菌第29页
    2.4.3 农杆菌转化苹果第29-30页
    2.4.4 农杆菌侵染拟南芥第30-31页
  2.5 转化植株检测第31-32页
    2.5.1 PCR鉴定第31页
    2.5.2 转化植株离体叶片再生鉴定第31页
    2.5.3 qRT-PCR检测MdChi基因在转基因植株中的表达第31-32页
  2.6 转化植株抗病性检测第32-34页
    2.6.1 灰霉菌悬浮液的制备第32页
    2.6.2 病情指数调查第32-34页
3 结果与分析第34-49页
  3.1 苹果MdChi基因的克隆与分析第34-38页
    3.1.1 总RNA的提取第34页
    3.1.2 PCR扩增苹果MdChi基因第34-35页
    3.1.3 菌液PCR扩增第35页
    3.1.4 苹果MdChi氨基酸序列第35页
    3.1.5 苹果MdChi氨基酸结构分析第35-37页
    3.1.6 同源性与系统发育分析第37-38页
  3.2 苹果MdChi基因过表达载体构建及转化农杆菌第38-40页
    3.2.1 酶切pRI 101 AN和pMD-MdChi载体第38-39页
    3.2.2 目的片段与载pRI 101 AN的连接第39-40页
    3.2.3 重组过表达载体的验证第40页
    3.3. 拟南芥遗传转化及转基因植株的鉴定第40-43页
    3.3.1 过表达载体转化农杆菌第40-41页
    3.3.2 拟南芥遗传转化第41页
    3.3.3 转基因拟南芥PCR鉴定第41-43页
  3.4 苹果遗传转化及转基因植株的鉴定第43-46页
    3.4.1 过表达载体转化农杆菌第43页
    3.4.2 苹果遗传转化第43-44页
    3.4.3 转基因苹果PCR鉴定第44-45页
    3.4.4 卡那霉素抗性鉴定第45页
    3.4.5 转基因苹果植株中MdChi基因的表达分析第45-46页
  3.5 转基因植株抗病性检测第46-49页
    3.5.1 拟南芥转基因植株抗病性检测第46-47页
    3.5.2 苹果转基因植株抗病性检测第47-49页
4 讨论第49-51页
  4.1 几丁质酶的结构第49页
  4.2 MdChi的生物学功能第49-50页
  4.3 MdChi诱导病程相关蛋白基因表达第50-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-59页
致谢第59页

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