论文目录 | |
| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 蛋白磷酸酶的发现 | 第13-14页 |
| 1.2 蛋白磷酸酶的分类和特点 | 第14-15页 |
| 1.3 蛋白磷酸酶PSPs家族的进化和生理生化功能 | 第15-16页 |
| 1.4 蛋白磷酸酶PP2C的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.5 蛋白磷酸酶PP2C的生物学功能 | 第17-24页 |
| 1.5.1 蛋白磷酸酶PP2C参与调控植物生长发育过程 | 第18页 |
| 1.5.2 蛋白磷酸酶PP2C与非生物胁迫 | 第18-19页 |
| 1.5.3 蛋白磷酸酶PP2C与生物胁迫 | 第19-21页 |
| 1.5.4 蛋白磷酸酶PP2C参与ABA介导的信号途径 | 第21-23页 |
| 1.5.5 多种信号分子通路间的密切关系 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 供试菌株与载体 | 第25页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 实验材料的培养及处理 | 第27-28页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 植物RNA快速提取试剂盒提取棉花和烟草总RNA | 第28页 |
| 2.2.2.2 CTAB法提取棉花总RNA | 第28-29页 |
| 2.2.2.3 Trizol法提取烟草总RNA | 第29页 |
| 2.2.3 植物总DNA的提取与检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 小量法提取烟草DNA | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 CTAB法提取棉花DNA | 第30页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一条链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.5 GhPP2C60开放阅读框的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.6 GhPP2C60启动子序列的获得 | 第32页 |
| 2.2.7 PCR扩增后目的片段的回收 | 第32-33页 |
| 2.2.8 目的片段连接载体 | 第33页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第33-34页 |
| 2.2.9.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.9.2 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第34页 |
| 2.2.10 使用微量法提取质粒DNA | 第34-35页 |
| 2.2.11 酶切验证重组质粒 | 第35页 |
| 2.2.12 植物正义表达载体的构建与转化 | 第35-37页 |
| 2.2.12.1 正义表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.12.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.12.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第36-37页 |
| 2.2.12.4 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第37页 |
| 2.2.13 转基因超表达烟草植株的获得与鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.13.1 农杆菌介导转化烟草（叶盘法） | 第37-38页 |
| 2.2.13.2 转基因植株的筛选（PCR扩增法） | 第38页 |
| 2.2.13.3 qRT-PCR检测目的基因的表达量 | 第38-39页 |
| 2.2.14 利用VIGS沉默棉花植株 | 第39页 |
| 2.2.15 3, 3'-二氨基联苯胺染色 | 第39-43页 |
| 2.2.16 气孔开闭实验 | 第39页 |
| 2.2.17 植物总蛋白的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.17.1 棉花总蛋白的提取 | 第39页 |
| 2.2.17.2 烟草总蛋白的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.18 GhPP2C60原核表达载体的构建及表达 | 第40-41页 |
| 2.2.18.1 原核表达载体的构建 | 第40页 |
| 2.2.18.2 GhPP2C60的原核表达 | 第40页 |
| 2.2.18.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.2.19 抗体的制备与应用 | 第41-42页 |
| 2.2.19.1 抗体的制备工作 | 第41页 |
| 2.2.19.2 Western blotting检测 | 第41-42页 |
| 2.2.20 软件及网络信息资源 | 第42-43页 |
| 2.2.20.1 网络信息资源 | 第42页 |
| 2.2.20.2 所用软件 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-63页 |
| 3.1 棉花GhPP2C60基因的分离 | 第43-44页 |
| 3.1.1 GhPP2C60开放阅读框的分离 | 第43页 |
| 3.1.2 GhPP2C60启动子序列的分离 | 第43-44页 |
| 3.2 GhPP2C60基因的序列分析 | 第44-46页 |
| 3.2.1 GhPP2C60氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
| 3.2.2 GhPP2C60进化树分析 | 第45-46页 |
| 3.3 GhPP2C60亚细胞定位分析 | 第46-47页 |
| 3.4 GhPP2C60基因的表达特性分析 | 第47-49页 |
| 3.4.1 GhPP2C60在棉花不同组织中的表达特性分析 | 第47-48页 |
| 3.4.2 GhPP2C60在多种处理下转录水平上的表达特性分析 | 第48-49页 |
| 3.5 GhPP2C60的原核表达和多种处理下蛋白表达特性 | 第49-51页 |
| 3.5.1 GhPP2C60的原核表达及抗体制备 | 第49-50页 |
| 3.5.2 GhPP2C60在多种处理下蛋白水平上的表达特性分析 | 第50-51页 |
| 3.6 GhPP2C60超表达烟草植株的获得与鉴定 | 第51-52页 |
| 3.6.1 GhPP2C60超表达烟草植株的获得 | 第51页 |
| 3.6.2 GhPP2C60超表达烟草植株的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.7 GhPP2C60基因的生物学功能分析 | 第52-60页 |
| 3.7.1 GhPP2C60超表达植株对高温胁迫的敏感性 | 第52-54页 |
| 3.7.2 ABA对GhPP2C60超表达烟草植株的影响 | 第54-56页 |
| 3.7.3 GhPP2C60超表达植株对病原细菌侵染的敏感性 | 第56-58页 |
| 3.7.4 高温和Pst DC3000病原细菌处理后抗性相关基因的表达特性分析 | 第58-60页 |
| 3.8 GhPP2C60棉花沉默植株对高温及病原细菌的抗性分析 | 第60-63页 |
| 3.8.1 GhPP2C60棉花沉默植株对高温胁迫的抗性分析 | 第60-61页 |
| 3.8.2 GhPP2C60棉花沉默植株对病原菌胁迫的抗性分析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-69页 |
| 4.1 GhPP2C60属于PP2C家族中I亚族 | 第63-64页 |
| 4.2 GhPP2C60的亚细胞定位 | 第64页 |
| 4.3 GhPP2C60的表达受多种逆境胁迫及信号分子的影响 | 第64-65页 |
| 4.4 GhPP2C60参与响应高温胁迫过程 | 第65-66页 |
| 4.5 GhPP2C60通过JA途径增强超表达植株对Pst DC3000病原菌的敏感性 | 第66-67页 |
| 4.6 GhPP2C60参与ABA与JA介导的信号通路植株抵御高温及病害胁迫 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第81页 |
