论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第12-13页 |
| 1.2 黏膜免疫概述 | 第13-14页 |
| 1.3 sIgA与黏膜免疫 | 第14-16页 |
| 1.3.1 sIgA的结构与分类 | 第14页 |
| 1.3.2 sIgA的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.3.3 sIgA抗体检测的意义 | 第15-16页 |
| 1.4 ELISA检测方法的介绍 | 第16页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 A型FMDV VP1基因在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达及鉴定 | 第18-29页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 病毒和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要培养基和试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要设备 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第20页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组质粒的诱导表达及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 VP1蛋白的大量表达与纯化 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 重组表达质粒的PCR和酶切鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.3.2 重组大肠杆菌的表达与鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 VP1蛋白的大量表达与纯化结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 FMDV黏膜特异性sIgA抗体ELISA检测方法的建立 | 第29-41页 |
| 3.1 材料 | 第29页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.2 主要设备 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 ELISA操作程序 | 第29页 |
| 3.2.2 抗原最佳包被浓度及最佳包被抗原的选择 | 第29-30页 |
| 3.2.3 最佳封闭液的选择 | 第30页 |
| 3.2.4 二抗和三抗最佳稀释度的确定 | 第30页 |
| 3.2.5 样品孵育时间的确定 | 第30页 |
| 3.2.6 二抗和三抗作用时间的确定 | 第30页 |
| 3.2.7 底物作用时间 | 第30页 |
| 3.2.8 sIgA-ELISA的阴阳性临界值的确定 | 第30-31页 |
| 3.2.9 sIgA-ELISA的重复性试验 | 第31页 |
| 3.2.10 sIgA-ELISA的敏感性和特异性试验 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 3.3.1 包被蛋白浓度的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 最佳封闭液的确定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 二抗和三抗最佳稀释度和作用时间的确定 | 第33-34页 |
| 3.3.4 样品最佳反应时间的选择 | 第34-35页 |
| 3.3.5 鼠抗猪IgA单抗作用时间的确定 | 第35-36页 |
| 3.3.6 HRP标记的羊抗鼠IgG抗体作用时间的确定 | 第36-37页 |
| 3.3.7 底物作用时间的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.8 sIgA-ELISA的重复性试验结果 | 第38页 |
| 3.3.9 sIgA-ELISA的阴阳性临界值的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.10 sIgA-ELISA的特异性和敏感性试验结果 | 第39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 FMDV黏膜特异性sIgA抗体ELISA检测方法的应用 | 第41-49页 |
| 4.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1 毒株和动物 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 4.2 实验内容 | 第41-43页 |
| 4.2.1 动物实验分组 | 第41-42页 |
| 4.2.2 样品的采集 | 第42页 |
| 4.2.3 临床样品的检测 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.3.1 18 头猪鼻拭子中FMDV特异性IgA抗体的统计情况 | 第43-44页 |
| 4.3.2 18 头猪血清中FMDV特异性IgG抗体的统计情况 | 第44-45页 |
| 4.3.3 18 头猪血清中FMDV特异性 3ABC抗体的统计情况 | 第45-46页 |
| 4.3.4 18 头猪鼻拭子中FMDV含量的统计情况 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |
