论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 | 第13-14页 |
| 1.1.1 生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2 病毒入侵 | 第14页 |
| 1.2 PRRSV侵染Marc-145 的受体 | 第14-16页 |
| 1.2.1 CD163受体 | 第15页 |
| 1.2.2 唾液酸黏附素SN受体 | 第15页 |
| 1.2.3 硫酸乙酰肝素HS受体 | 第15-16页 |
| 1.2.4 CD151和波形蛋白 | 第16页 |
| 1.3 细胞型朊蛋白PrPc的结构与功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 PrPc的结构特征 | 第16页 |
| 1.3.2 PrPc的生理功能 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PrPc调控巨噬细胞的吞噬和炎性反应 | 第17-18页 |
| 1.3.4 位于脂筏的PrPc协助细菌逃逸巨噬细胞免疫杀伤 | 第18页 |
| 1.4 脂筏在PRRSV侵染宿主细胞中的作用 | 第18-19页 |
| 1.5 PrPc在PRRSV侵染巨噬细胞中的作用 | 第19页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 PRRSV感染野生型Marc-145 细胞对PrPc表达的影响 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 毒株、细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验所需溶液及其配制 | 第22页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第22页 |
| 2.1.5 CD163、PRRSV和PrPc重组质粒的构建 | 第22-24页 |
| 2.1.6 建立标准曲线 | 第24页 |
| 2.1.7 样品收集与检测 | 第24页 |
| 2.1.8 PRRSV的免疫荧光 | 第24-25页 |
| 2.1.9 PrPc、CD163的免疫荧光 | 第25页 |
| 2.1.10 激光共聚焦技术检测PrPc/CD163与PRRSV的共定位 | 第25-26页 |
| 2.2 实验结果 | 第26-31页 |
| 2.2.1 RT-PCR鉴定结果 | 第26页 |
| 2.2.2 标准曲线的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.3 样品检测结果 | 第27-28页 |
| 2.2.4 PRRSV免疫荧光结果 | 第28-29页 |
| 2.2.5 PrPc免疫荧光结果 | 第29页 |
| 2.2.6 CD163免疫荧光结果 | 第29-30页 |
| 2.2.7 CD163与PRRSV的共定位 | 第30页 |
| 2.2.8 PrPc与PRRSV的共定位 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论与分析 | 第31-33页 |
| 第三章 提高Marc-145 细胞PrPc蛋白表达量对PRRSV复制的影响 | 第33-41页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第33-36页 |
| 3.1.1 载体、模板及菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 实验所用溶液及其配制 | 第33页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第33页 |
| 3.1.5 PrPc基因扩增回收 | 第33-34页 |
| 3.1.6 连接转化 | 第34-35页 |
| 3.1.7 去内毒素的无菌质粒的提取 | 第35页 |
| 3.1.8 细胞转染 | 第35页 |
| 3.1.9 细胞回收 | 第35页 |
| 3.1.10 BCA蛋白定量 | 第35页 |
| 3.1.11 Western-Blot检测 | 第35-36页 |
| 3.1.12 RNA提取 | 第36页 |
| 3.1.13 荧光定量PCR扩增分析 | 第36页 |
| 3.2 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.2.1 RT-PCR基因产物 | 第36页 |
| 3.2.2 双酶切结果 | 第36-37页 |
| 3.2.3 Western-blot检测结果 | 第37-38页 |
| 3.2.4 PrPc过表达对PRRSV的BHK-21 细胞敏感性的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.5 PrPc过表达对PRRSV在Marc-145 细胞复制的影响 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论与分析 | 第40-41页 |
| 第四章 降低Marc-145 细胞PrPc功能对PRRSV复制的影响 | 第41-47页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第41-43页 |
| 4.1.1 毒株、细胞 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 实验所用溶液及其配制 | 第41页 |
| 4.1.4 SAF-32 抗体阻断 | 第41-42页 |
| 4.1.5 SAF-32 抗体阻断依赖性实验 | 第42页 |
| 4.1.6 RNAi引物设计 | 第42页 |
| 4.1.7 RNAi试验 | 第42页 |
| 4.1.8 细胞回收 | 第42-43页 |
| 4.1.9 BCA蛋白定量 | 第43页 |
| 4.1.10 Western-Blot检测 | 第43页 |
| 4.1.11 RNA提取 | 第43页 |
| 4.1.12 荧光定量PCR扩增分析 | 第43页 |
| 4.2 实验结果 | 第43-45页 |
| 4.2.1 SAF-32 抗体阻断结果 | 第43-44页 |
| 4.2.2 SAF-32 抗体阻断依赖性结果 | 第44页 |
| 4.2.3 Western-Blot结果 | 第44页 |
| 4.2.4 荧光定量结果 | 第44-45页 |
| 4.3 讨论与分析 | 第45-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
