论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 流感病毒的形态和结构 | 第12-13页 |
| 1.2 流感病毒的复制 | 第13-14页 |
| 1.2.1 病毒的吸附、入侵和脱壳 | 第13页 |
| 1.2.2 mRNA合成及病毒RNA复制 | 第13-14页 |
| 1.2.3 病毒组装和释放 | 第14页 |
| 1.3 流感病毒M2蛋白的结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.4 细胞自噬 | 第15-18页 |
| 1.4.1 细胞自噬概述 | 第15页 |
| 1.4.2 细胞自噬的分类 | 第15页 |
| 1.4.3 细胞自噬发生的过程 | 第15-16页 |
| 1.4.4 细胞自噬调控通路 | 第16-17页 |
| 1.4.5 细胞自噬与神经退行性疾病 | 第17页 |
| 1.4.6 细胞自噬与癌症 | 第17-18页 |
| 1.4.7 细胞自噬与病毒感染 | 第18页 |
| 1.5 相关研究方法 | 第18-20页 |
| 1.5.1 GFP-LC3荧光的迁移 | 第18页 |
| 1.5.2 Western blot检测LC3转化 | 第18-19页 |
| 1.5.3 mRFP-GFP-LC3串联表达系统 | 第19页 |
| 1.5.4 LC3 turnover实验 | 第19-20页 |
| 1.5.5 免疫共沉淀技术 | 第20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 A型流感病毒M2蛋白通过抑制自噬体成熟诱导自噬体积累 | 第21-33页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 主要载体、菌株和细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.2 LC3、M2目的基因扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.3 克隆载体的酶切 | 第23页 |
| 2.2.4 同源重组 | 第23页 |
| 2.2.5 转化 | 第23-24页 |
| 2.2.6 阳性克隆鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 重组质粒提取 | 第25页 |
| 2.2.8 Western blot检测LC3的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.9 GFP-LC3转染细胞检测自噬体形成 | 第26页 |
| 2.2.10 LC3-II turnover试验 | 第26页 |
| 2.2.11 mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统 | 第26-27页 |
| 2.2.12 LAMP1与LC3的共定位观察 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 重组质粒GFP-LC3和pCAF-M2的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.2 透射电镜观察自噬体 | 第28页 |
| 2.3.3 GFP-LC3检测自噬体的变化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Western blot检测LC3的转化 | 第29-30页 |
| 2.3.5 LC3-II turnover试验 | 第30-31页 |
| 2.3.6 mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统 | 第31页 |
| 2.3.7 LAMP1与LC3的共定位观察 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 A型流感病毒M2蛋白抑制自噬体成熟作用机制的研究 | 第33-42页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 主要载体、菌株和细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第33-35页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第35页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀（Co-IP） | 第35-36页 |
| 3.2.4 Beclin1蛋白与M2蛋白的共定位观察 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 pCAH-Beclin1、p CAF-UVRAG、GFP-M2和DsRed-M2重组质粒的构建 | 第36页 |
| 3.3.2 Beclin1蛋白与M2蛋白免疫共沉淀 | 第36-37页 |
| 3.3.3 Beclin1蛋白与M2蛋白共定位检测 | 第37页 |
| 3.3.4 Beclin1、UVRAG与M2蛋白互作研究 | 第37-38页 |
| 3.3.5 M2蛋白截短表达对自噬水平的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.6 M2蛋白单个氨基酸缺失对自噬水平的影响 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 全文结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简历 | 第50页 |
