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水禽呼肠孤病毒P18蛋白鉴定及其反向遗传操作平台的建立

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水禽呼肠孤病毒P18蛋白鉴定及其反向遗传操作平台的建立
论文目录
 
摘要第1-8页
abstract第8-14页
第一章 引言第14-23页
  1.1 禽源呼肠孤病毒概况第14-16页
    1.1.1 鸡呼肠孤病毒第14-15页
    1.1.2 番鸭呼肠孤病毒第15页
    1.1.3 鸭呼肠孤病毒第15-16页
  1.2 禽呼肠孤病毒S1基因节段基因结构特征第16-18页
  1.3 禽呼肠孤病毒S1基因节段编码蛋白第18-21页
    1.3.1 P10蛋白的功能第19-20页
    1.3.2 P17蛋白的功能第20页
    1.3.3 σC蛋白的功能第20-21页
  1.4 呼肠孤病毒反向遗传操作系统的发展第21-22页
  1.5 本研究的目的以及意义第22-23页
第二章 水禽呼肠孤病毒P18蛋白功能初步研究第23-32页
  2.1 材料第23-24页
    2.1.1 病毒、载体、细胞和动物第23-24页
    2.1.2 主要试剂第24页
    2.1.3 主要仪器设备第24页
  2.2 研究方法第24-26页
    2.2.1 P18基因的扩增(EcoR I、Kpn I两个酶切位点)第24-25页
    2.2.2 重组表达质粒的构建与鉴定第25页
    2.2.3 pCold-TF-S1-P18蛋白的诱导表达及纯化第25页
    2.2.4 抗pCold-TF-S1-P18多抗的制备第25页
    2.2.5 多克隆抗体的特异性检测第25页
    2.2.6 P18蛋白表达时相分析第25-26页
    2.2.7 IHC检测P18蛋白在组织中分布第26页
  2.3 结果第26-30页
    2.3.1 pCold-TF-S1-P18蛋白的诱导表达及纯化第26-28页
    2.3.2 重组pCold-TF-P18蛋白多克隆抗体的Western-blot检测第28-29页
    2.3.3 重组pCold-TF-P18蛋白表达时相分析第29-30页
    2.3.4 IHC检测组织中病毒分布情况第30页
  2.4 讨论第30-32页
第三章 水禽呼肠孤病毒反向遗传操作系统的建立及鉴定第32-53页
  3.1 材料第32-33页
    3.1.1 病毒、载体、质粒和细胞第32页
    3.1.2 实验动物和SPF鸡胚第32页
    3.1.3 主要试剂第32-33页
    3.1.4 主要溶液及试剂的配制第33页
  3.2 研究方法第33-42页
    3.2.1 引物的设计与合成第33-34页
    3.2.2 病毒RNA的提取第34页
    3.2.3 10 个全长基因节段的c DNA的合成第34-35页
    3.2.4 10 个全长基因节段的扩增与克隆第35-36页
    3.2.5 体外转录载体的设计与改造第36页
    3.2.6 分子标签引入第36-37页
    3.2.7 病毒10个基因节段的扩增与克隆第37页
    3.2.8 SDS碱裂解法大量提取10个质粒第37-38页
    3.2.9 病毒的拯救第38页
    3.2.10 拯救病毒的RT-PCR和分子标签的鉴定第38-39页
    3.2.11 拯救病毒的细胞攻毒试验第39页
    3.2.12 拯救病毒的Western-blot检测第39页
    3.2.13 拯救病毒的间接免疫荧光检测第39-40页
    3.2.14 拯救病毒的蚀斑试验第40页
    3.2.15 拯救病毒的一步生长曲线绘制第40页
    3.2.16 鸭致病性试验第40-41页
    3.2.17 病理组织切片观察第41页
    3.2.18 免疫组织化学检测第41-42页
  3.3 结果第42-51页
    3.3.1 拯救病毒的RT-PCR检测第42页
    3.3.2 拯救病毒分子标签的引入第42-43页
    3.3.3 拯救病毒的细胞病变第43-44页
    3.3.4 拯救病毒的Western-blot检测第44页
    3.3.5 拯救病毒的IFA检测第44页
    3.3.6 拯救病毒的蚀斑检测第44-46页
    3.3.7 拯救病毒的生长曲线测定第46-47页
    3.3.8 拯救病毒的鸡胚致死试验第47页
    3.3.9 拯救病毒的动物回归试验第47-48页
    3.3.10 拯救病毒的组织病理切片和免疫组化观察第48-51页
  3.4 讨论第51-53页
    3.4.1 T7 RNA聚合酶介导的呼肠孤病毒的拯救系统第51-52页
    3.4.2 分子标签的引入和载体的构建第52页
    3.4.3 病毒的拯救效率第52-53页
第四章 结论第53-54页
参考文献第54-60页
致谢第60-61页
作者简历第61页

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