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牛流行热病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立与应用

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牛流行热病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立与应用
论文目录
 
摘要第1-6页
abstract第6-12页
英文缩略表第12-13页
第一章 引言第13-19页
  1.1 病原学第13-14页
  1.2 BEFV的流行病学第14-16页
    1.2.1 宿主第14页
    1.2.2 传播途径第14页
    1.2.3 地理分布第14-16页
  1.3 BEFV的临床症状第16页
  1.4 BEFV的诊断方法第16页
    1.4.1 血清学诊断第16页
    1.4.2 分子生物学检测第16页
  1.5 BEFV疫苗研究进展第16-17页
  1.6 研究背景、目的和意义第17-19页
第二章 BEFV G蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备第19-29页
  2.1 材料第19-20页
    2.1.1 实验毒株及实验动物第19页
    2.1.2 试剂第19页
    2.1.3 仪器设备第19-20页
  2.2 方法第20-25页
    2.2.1 目的基因的RT-PCR扩增第20-21页
    2.2.2 目的片段胶回收第21页
    2.2.3 目的片段的连接、转化和测序第21-22页
    2.2.4 原核表达载体的构建第22-24页
    2.2.5 重组质粒的的原核表达第24页
    2.2.6 重组蛋白的纯化第24页
    2.2.7 BEFV G蛋白的鉴定第24-25页
    2.2.8 兔源多克隆抗体的制备和鉴定第25页
  2.3 结果第25-28页
    2.3.1 BEFV G基因的克隆和序列测定第25-26页
    2.3.2 原核表达载体的构建第26页
    2.3.3 重组蛋白的表达及纯化第26-27页
    2.3.4 重组蛋白的免疫原性分析第27页
    2.3.5 兔源多克隆抗体的制备和鉴定第27-28页
  2.4 讨论第28-29页
第三章 BEFV抗原捕获ELISA诊断方法的建立第29-34页
  3.1 实验材料第29页
    3.1.1 病毒和样品第29页
    3.1.2 主要试剂第29页
    3.1.3 主要仪器第29页
  3.2 实验方法第29-30页
    3.2.1 捕获抗体与单抗最佳结合浓度的选择第29-30页
    3.2.2 酶标抗体工作浓度的确定第30页
    3.2.3 封闭液的选择第30页
    3.2.4 底物显色时间的确定第30页
    3.2.5 交叉试验第30页
  3.3 结果第30-33页
    3.3.1 捕获抗体与单抗最佳结合浓度的选择第30-31页
    3.3.2 酶标抗体工作浓度的确定第31-32页
    3.3.3 封闭液的选择第32页
    3.3.4 底物显色时间的确定第32-33页
    3.3.5 交叉试验第33页
  3.4 讨论第33-34页
第四章 天祝白牦牛牛流行热的调查第34-39页
  4.1 实验材料第34页
    4.1.1 样品第34页
    4.1.2 试剂第34页
  4.2 方法第34-37页
    4.2.1 引物设计与合成第34-35页
    4.2.2 BEFV抗体检测第35页
    4.2.3 BEFV抗原捕获ELISA检测第35页
    4.2.4 BEFV实时荧光定量RT-PCR检测第35页
    4.2.5 BEFV G基因 3’片段的扩增及进化分析第35-37页
  4.3 结果第37-38页
    4.3.1 检测结果第37页
    4.3.2 BEFV G基因的扩增及进化分析第37-38页
  4.4 讨论第38-39页
第五章 BEFV病毒的分离及全基因组的测定第39-44页
  5.1 实验材料第39页
    5.1.1 细胞与毒株第39页
    5.1.2 实验动物第39页
    5.1.3 实验试剂第39页
  5.2 实验方法第39-41页
    5.2.1 实验感染模型的建立第39页
    5.2.2 RT-PCR测病毒血症第39页
    5.2.3 病毒的分离第39-40页
    5.2.4 RT-PCR方法鉴定分离毒株第40页
    5.2.5 抗原捕获ELISA检测第40页
    5.2.6 BEFV JT02L毒株全基因组测序第40-41页
  5.3 实验结果第41-43页
    5.3.1 临床症状第41-42页
    5.3.2 RT-PCR检测病毒血症病毒检测第42页
    5.3.3 病毒的分离及鉴定第42页
    5.3.4 抗原捕获ELISA诊断BEFV第42-43页
    5.3.5 BEFV JT02L毒株全基因组测序第43页
  5.4 讨论第43-44页
第六章 全文结论第44-45页
参考文献第45-50页
附录第50-56页
致谢第56-57页
作者简历第57页

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