论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 非洲猪瘟概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 非洲猪瘟 | 第14页 |
| 1.1.2 非洲猪瘟的病原学 | 第14-15页 |
| 1.1.3 非洲猪瘟的起源和流行分布 | 第15-16页 |
| 1.1.4 非洲猪瘟的临床症状和病理变化 | 第16页 |
| 1.1.5 非洲猪瘟的诊断 | 第16页 |
| 1.2 非洲猪瘟疫苗研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第16-17页 |
| 1.2.2 弱毒疫苗 | 第17页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第17页 |
| 1.2.4 DNA疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3 新城疫病毒反向遗传操作系统及其应用 | 第18页 |
| 1.3.1 新城疫病毒的反向遗传操作 | 第18页 |
| 1.3.2 新城疫病毒载体系统的应用 | 第18页 |
| 1.4 活载体痘苗病毒及其应用 | 第18-19页 |
| 1.5 CTL表位的研究 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 ASFV结构蛋白重组质粒的鉴定 | 第22-26页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 质粒、血清、细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组pCAGGS表达蛋白的western blot鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.2 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组pCAGGS表达蛋白在BHK-21 细胞中的表达定位 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-24页 |
| 2.3.1 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组pCAGGS表达蛋白的western blot鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组pCAGGS表达蛋白在BHK-21 细胞中的表达定位 | 第24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 ASFV结构蛋白重组NDV的构建与鉴定 | 第26-30页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 细胞、血清、质粒、病毒株及实验动物 | 第26页 |
| 3.1.2 试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 仪器 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-28页 |
| 3.2.1 分别表达ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组NDV基因组cDNA的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.2 重组NDV病毒的拯救 | 第27页 |
| 3.2.3 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组NDV的western blot鉴定 | 第27页 |
| 3.2.4 ASFV-p72、p54、CD2v及p30在重组NDV感染BHK-21 细胞中的表达定位 | 第27-28页 |
| 3.3 结果 | 第28-29页 |
| 3.3.1 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组NDV的western blot鉴定 | 第28页 |
| 3.3.2 ASFV-p72、p54、CD2v及p30在重组NDV感染BHK-21 细胞中的表达定位 | 第28-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 ASFV结构蛋白重组VV的构建与鉴定 | 第30-37页 |
| 4.1 材料 | 第30页 |
| 4.1.1 细胞、病毒株与实验动物 | 第30页 |
| 4.1.2 仪器 | 第30页 |
| 4.1.3 试剂 | 第30页 |
| 4.2 方法 | 第30-33页 |
| 4.2.1 VV基因组的提取 | 第30-31页 |
| 4.2.2 VV基因组的Apa I酶切 | 第31页 |
| 4.2.3 VV基因组与质粒共转染BHK-21 细胞 | 第31-32页 |
| 4.2.4 重组VV的PCR鉴定 | 第32页 |
| 4.2.5 ASFV蛋白在重组VV感染细胞中的表达及定位 | 第32页 |
| 4.2.6 重组VV生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 4.2.7 重组VV在小鼠的安全性评价 | 第33页 |
| 4.3 结果 | 第33-35页 |
| 4.3.1 重组VV PCR鉴定 | 第33页 |
| 4.3.2 ASFV-p72、p54、CD2v及p30重组VV的western blot鉴定 | 第33-34页 |
| 4.3.3 ASFV蛋白在重组VV感染细胞中的表达定位 | 第34页 |
| 4.3.4 重组VV的生长动力学 | 第34-35页 |
| 4.3.5 重组VV在小鼠的安全性评价 | 第35页 |
| 4.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第五章 动物免疫实验与优势表位筛选 | 第37-53页 |
| 5.1 材料 | 第37-38页 |
| 5.1.1 质粒、病毒、细胞、鸡胚及实验动物 | 第37页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第37页 |
| 5.1.3 多肽的合成 | 第37-38页 |
| 5.2 方法 | 第38-41页 |
| 5.2.1 免疫程序的制定 | 第38页 |
| 5.2.2 质粒的大量制备 | 第38-39页 |
| 5.2.3 重组VV的扩大培养及TCID_(50)的测定 | 第39页 |
| 5.2.4 PBMC的分离 | 第39页 |
| 5.2.5 实验对象猪群的SLA-I基因序列的测定分析 | 第39-40页 |
| 5.2.6 ELISPOT实验 | 第40-41页 |
| 5.2.7 酶联免疫斑点计数 | 第41页 |
| 5.3 结果 | 第41-50页 |
| 5.3.1 猪SLA-I基因序列的分析 | 第41-45页 |
| 5.3.2 表位筛选分析 | 第45-50页 |
| 5.3.3 免疫程序的比较 | 第50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第六章 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
