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羊无浆体间接ELISA检测方法的建立与应用

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羊无浆体间接ELISA检测方法的建立与应用
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-12页
英文缩略表第12-13页
第一章 引言第13-21页
  1.1 病原学特征第13-14页
  1.2 生活史第14页
  1.3 流行病学第14-15页
  1.4 临床症状及病理变化第15页
  1.5 诊断技术第15-19页
    1.5.1 病原学诊断第15-16页
    1.5.2 血涂片镜检第16页
    1.5.3 动物接种试验第16页
    1.5.4 体外培养第16页
    1.5.5 血清学诊断第16-17页
      1.5.5.1 补体结合试验(CFT)第16页
      1.5.5.2 间接免疫荧光抗体试验(IFA)第16-17页
      1.5.5.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)第17页
    1.5.6 分子生物学诊断第17-19页
      1.5.6.1 核酸探针检测方法(DNA probe)第17-18页
      1.5.6.2 聚合酶链式反应(PCR)第18页
      1.5.3.3 实时荧光定量PCR第18页
      1.5.6.4 反向线性印迹技术(RLB)第18页
      1.5.6.5 环介导等温扩增(LAMP)第18-19页
  1.6 无浆体的相关蛋白研究进展第19页
  1.7 本研究的目的和意义第19-21页
第二章 目的蛋白的筛选及其生物信息学分析第21-29页
  2.1 材料第21-22页
    2.1.1 主要仪器第21页
    2.1.2 主要试剂第21页
    2.1.3 实验材料第21-22页
      2.1.3.1 菌株第21页
      2.1.3.2 实验动物和血清第21-22页
  2.2 方法第22-23页
    2.2.1 菌体纯化第22页
    2.2.2 血清纯化第22-23页
  2.3 质谱和生物信息学分析(Mass spectrometric analysis and bioinformationanalysis)第23页
  2.4 结果第23-28页
    2.4.1 羊无浆体的体内繁殖及纯化第23-24页
    2.4.2 纯化后的抗体SDS-PAGE分析结果第24页
    2.4.3 银染验证IP结果第24-25页
    2.4.4 质谱和生物信息学分析结果第25-28页
      2.4.4.1 蛋白的理化性质分析第25-26页
      2.4.4.2 蛋白的信号肽预测第26-27页
      2.4.4.3 蛋白的跨膜特征第27页
      2.4.4.4 蛋白的抗原性预测第27-28页
  2.5 讨论第28-29页
第三章 羊无浆体AAAP基因的克隆表达及多克隆抗体制备第29-37页
  3.1 材料第29-30页
    3.1.1 主要仪器第29页
    3.1.2 主要试剂第29页
    3.1.3 血清第29-30页
    3.1.4 实验动物第30页
  3.2 方法第30-33页
    3.2.1 引物的设计与合成第30页
    3.2.2 目的基因的PCR扩增第30-31页
    3.2.3 PCR产物目的片段胶回收第31页
    3.2.4 构建克隆载体pGEM-T Easy/AAAP第31页
    3.2.5 表达质粒的构建第31-32页
    3.2.6 BL21-pET-30a/AAAP的诱导表达第32页
    3.2.7 重组蛋白的可溶性分析第32页
    3.2.8 重组蛋白的纯化第32-33页
    3.2.9 重组蛋白的反应原性测定第33页
    3.2.10 兔源抗体的制备及特异性的判定第33页
  3.3 结果第33-36页
    3.3.1 羊无浆体AAAP基因的扩增第33-34页
    3.3.2 重组蛋白的表达和纯化第34-35页
    3.3.3 重组蛋白的Western-blot鉴定第35页
    3.3.4 多克隆抗体对天然蛋白的识别第35-36页
  3.4 讨论第36-37页
第四章 羊无浆体间接ELISA检测方法的建立第37-50页
  4.1 材料第37-38页
    4.1.1 主要仪器第37页
    4.1.2 主要试剂第37页
    4.1.3 抗原的制备第37-38页
    4.1.4 血清的采集第38页
      4.1.4.1 标准阴阳性性血清第38页
      4.1.4.2 阴阳性血清及其它血清第38页
  4.2 方法第38-41页
    4.2.1 间接ELISA试验程序第38-39页
    4.2.2 ELISA最佳反应条件筛选第39-41页
      4.2.2.1 抗原和抗体最佳工作浓度的筛选第39页
      4.2.2.2 酶结合物最佳稀释度的判定第39-40页
      4.2.2.3 封闭液的选择第40页
      4.2.2.4 ELISA阳性阈值和特异性、敏感性的判定第40页
      4.2.2.5 特异性实验(交叉实验)第40页
      4.2.2.6 抗体动态曲线的评价第40-41页
      4.2.2.7 中国部分地区羊无浆体病的血清学流行病学调查第41页
  4.3 结果第41-47页
    4.3.1 ELISA最佳反应条件的选择第41-42页
      4.3.1.1 抗原最佳稀释度的判定第41页
      4.3.1.2 血清最佳稀释度的判定第41-42页
      4.3.1.3 酶结合物最佳工作浓度的判定第42页
      4.3.1.4 封闭液的选择第42页
    4.3.2 ELISA阳性阈值和特异性、敏感性的确定第42-43页
    4.3.3 特异性试验(交叉试验)第43页
    4.3.4 抗体动态曲线的评价第43-45页
    4.3.5 中国部分地区羊无浆体病的血清学流行病学调查第45-47页
  4.4 讨论第47-50页
第五章 全文总结第50-51页
参考文献第51-57页
致谢第57-59页
作者简介第59页

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