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小鼠骨骼肌发育相关环状RNA的鉴定和功能研究

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小鼠骨骼肌发育相关环状RNA的鉴定和功能研究
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 引言第12-20页
  1.1 骨骼肌的发育第12页
  1.2 参与骨骼肌发育调节的基因第12-13页
    1.2.1 生肌调节因子家族和肌细胞增强因子家族第12页
    1.2.2 Pax基因家族第12-13页
    1.2.3 肌肉生长抑制因子(MSTN)第13页
    1.2.4 非编码基因第13页
  1.3 环状RNA的概述第13-16页
    1.3.1 环状RNA的成环方式第13-15页
    1.3.2 环状RNA的主要特征第15页
    1.3.3 环状RNA的功能研究第15-16页
  1.4 环状RNA研究策略第16-18页
    1.4.1 环状RNA鉴定与差异筛选第16-17页
    1.4.2 环状RNA的生物信息学分析第17-18页
    1.4.3 环状RNA的功能验证第18页
  1.5 miRNAs的简介第18-19页
    1.5.1 miRNAs的生成机制第18页
    1.5.2 miRNAs的作用机制及作用第18-19页
    1.5.3 miRNAs在肌肉发育中的作用第19页
  1.6 环状RNA在肌肉发育中研究的现状第19-20页
第二章 实验仪器设备、材料与方法第20-35页
  2.1 实验仪器设备第20页
  2.2 实验材料及试剂及配制第20-23页
    2.2.1 实验材料第20-21页
    2.2.2 试剂配制第21-23页
  2.3 实验方法第23-33页
    2.3.1 细胞复苏第23页
    2.3.2 细胞传代第23-24页
    2.3.3 细胞冻存第24页
    2.3.4 细胞分化第24页
    2.3.5 细胞转染第24-25页
    2.3.6 CCK8细胞增殖测定实验第25-26页
    2.3.7 C2C12细胞的流式分析第26-27页
    2.3.8 C2C12细胞核质分离实验第27页
    2.3.9 细胞RNA提取第27-28页
    2.3.10 RNA的反转录(cDNA的合成)第28页
    2.3.11 miRNA的反转录第28-29页
    2.3.12 荧光定量PCR(qPCR)体系及反应程序第29页
    2.3.13 环状RNA的酶切实验(RNase R)第29页
    2.3.14 基因克隆第29-32页
    2.3.15 环状RNA与miRNA结合位点的靶标验证第32页
    2.3.16 环状RNA的过表达第32页
    2.3.17 细胞蛋白质提取及Western Blotting实验第32-33页
  2.4 本实验所用引物第33-35页
第三章 实验结果第35-53页
  3.1 环状RNA的芯片检测第35-41页
    3.1.1 总RNA的提取与质检结果第35页
    3.1.2 环状RNA芯片检测的结果第35-37页
    3.1.3 环状RNA的差异表达研究第37-41页
  3.2 环状RNA的鉴定分析及其表达量检测第41-44页
    3.2.1 PCR扩增第41-42页
    3.2.2 Rnase R酶切第42-43页
    3.2.3 环状RNA的表达量验证第43-44页
  3.3 环状RNA的细胞定位第44页
  3.4 环状RNA的敲低实验第44-45页
  3.5 Circ2196敲低后对C2C12成肌细胞增殖的影响第45页
  3.6 Circ2196敲低后对C2C12成肌细胞周期的影响第45-46页
  3.7 Circ2179敲低后后对C2C12成肌细胞对分化的影响第46-47页
  3.8 环状RNA与miRNA的作用第47-50页
    3.8.1 环状RNA与miRNA结合位点预测第47-48页
    3.8.2 环状RNA与miRNA结合位点(靶标)的荧光素酶的验证第48页
    3.8.3 Circ2196敲低后相应miRNA的表达量第48-49页
    3.8.4 过表达miRNAs后circ2196的表达量第49页
    3.8.5 siRNA、miRNA、inhibitor共转染对C2C12细胞增殖的影响第49-50页
  3.9 Circ2196过表达实验第50-51页
  3.10 Circ2196敲低和过表达对mi RNA-133 靶标基因SRF表达的影响第51页
  3.11 Circ2196和Circ2179的时空表达谱第51-53页
第四章 讨论第53-56页
第五章 全文结论第56-57页
  5.1 本论文研究结论第56页
  5.2 论文创新点第56页
  5.3 后续实验安排第56-57页
参考文献第57-63页
附录第63-64页
致谢第64-65页
作者简历第65页

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