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非洲猪瘟病毒蛋白p54原核真核表达、间接ELISA检测方法建立及单克隆抗体制备

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非洲猪瘟病毒蛋白p54原核真核表达、间接ELISA检测方法建立及单克隆抗体制备
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-6页
英文缩写表第6-7页
目录第7-10页
第一章 前言第10-23页
  ·非洲猪瘟的流行趋势第10-12页
  ·非洲猪瘟的病理学特征第12-15页
    · 非洲猪瘟的临床特征第12页
    · 非洲猪瘟常见宿主第12-14页
    · 非洲猪瘟病的传播途径第14-15页
  · 非洲猪瘟病毒形态学特征和主要组成蛋白第15-16页
  ·非洲猪瘟检测方法第16-21页
    · 病毒分离第17页
    · 分子生物学检测方法第17-20页
      · 常规 PCR第17-18页
      · 实时定量荧光 PCR第18-19页
      · 圆环介导的等温扩增第19-20页
    · 免疫学检测方法第20-21页
      · 抗原检测第20页
      · 抗体检测第20-21页
  · 本研究的目的及意义第21-22页
  · 技术路线第22-23页
第二章 非洲猪瘟病毒蛋白 p54 的原核表达及间接 ELISA 方法的建立第23-48页
  ·实验材料第23-26页
    · 主要实验试剂和仪器第23-24页
    · 主要溶液配方第24-26页
  · 实验方法第26-37页
    · p54 原核表达载体构建第26-32页
      · 目的基因扩增第26-27页
      · 目的基因片段回收第27-28页
      · 目的基因与表达载体连接第28-29页
      · 原核表达载体的转化和鉴定第29-32页
        · 大肠杆菌感受态细胞的制备第29-30页
        · 阳性克隆的筛选及鉴定第30-32页
    · 大肠杆菌的诱导表达及条件优化第32-33页
    · 重组表达蛋白的纯化及 Western-blot 分析第33-35页
      · 重组表达蛋白的纯化第33页
      · 重组表达蛋白的 Western-blot 分析第33-35页
    · 间接 ELISA 方法的建立第35-37页
      · 包被浓度和血清稀释度的确定第35页
      · ELISA 最佳反应条件的确定第35-36页
      · 重复性评价第36页
      · 阴阳性判定阈值与检测限的判定第36页
      · 符合率、特异性和灵敏性的评价第36-37页
  3 实验结果第37-48页
    · 原核表达载体的构建第37-41页
      · 目的基因的扩增第37页
      · 原核表达载体的鉴定第37-38页
      · 蛋白表达条件的优化第38-40页
      · 表达蛋白纯化的 SDS PAGE 和 Western blot 分析第40-41页
    · 间接 ELISA 方法的建立第41-48页
      · 最佳包被浓度和血清稀释倍数的确定第41-42页
      · 最佳反应条件的确定第42-44页
      · 重复性评价第44-46页
      · 阴阳性判定阈值与检测限的确定第46页
      · 符合率、灵敏性和特异性的评价第46-48页
第三章 非洲猪瘟病毒蛋白 p54 的真核表达及间接 ELISA 方法的建立第48-74页
  ·实验材料第48-51页
    · 主要实验试剂和仪器第48-49页
    · 主要溶液配方第49-51页
  · 实验方法第51-61页
    · 真核表达载体的构建第51-58页
      · 目的基因的扩增第51-52页
      · 目的基因与载体连接第52-55页
      · 重组质粒的转座和鉴定第55-57页
      · bacmid 的脂质化第57-58页
      · 重组杆状病毒的获得第58页
    · 重组蛋白的 SDS-PAGE 和 Western-blot 分析第58-59页
    · 间接 ELISA 检测方法的建立第59-61页
      · 最佳包被浓度和血清稀释倍数的确定第59页
      · ELISA 最佳反应条件的确定第59-60页
      · 重复性评价第60页
      · 阴阳性判定阈值与检测限的判定第60页
      · 符合率、特异性和灵敏性的评价第60-61页
  · 实验结果第61-74页
    · 真核表达载体的构建第61-66页
      · 目的基因的扩增第61页
      · 真核重组载体的鉴定第61-64页
      · 重组杆状病毒鉴定第64-65页
      · 重组杆状病毒的获得第65-66页
    · 重组蛋白的 SDS-PAGE 和 Western-blot 检测第66-68页
    · 间接 ELISA 检测方法的建立第68-74页
      · 最佳包被浓度和血清稀释倍数的确定第68-69页
      · 最佳反应条件的确定第69-71页
      · 重复性评价第71-72页
      · 阴阳性判定阈值与检测限的判定第72页
      · 符合率、灵敏性和特异性的评价第72-74页
第四章 非洲猪瘟病毒蛋白 p54 单克隆抗体制备第74-84页
  ·实验材料第74-76页
    · 主要实验试剂和仪器第74-75页
    · 主要溶液配方第75-76页
  2 实验方法第76-80页
    · 抗原免疫第76页
    · 免疫小鼠的选择及免疫血清效价的测定第76页
    · 骨髓瘤细胞 SP2/0 的培养和饲养细胞的制备第76-77页
      · 骨髓瘤细胞 SP2/0 的培养第76-77页
      · 饲养细胞制备第77页
    · 小鼠脾细胞与 SP2/0 细胞融合第77-78页
      · 小鼠脾细胞的获取第77-78页
      · 细胞融合第78页
    · 杂交瘤细胞的筛选及克隆第78-79页
    · 细胞建株第79页
    · 腹水型单抗制备第79-80页
  3 实验结果第80-84页
    · 免疫小鼠的选择及免疫血清效价的测定第80页
      · 免疫小鼠的选择第80页
      · 免疫血清效价测定第80页
    · 杂交瘤细胞的筛选第80-81页
    · 腹水型单抗的制备及纯化第81-84页
第五章 小结与讨论第84-87页
  · 小结第84页
  · 讨论第84-87页
参考文献第87-91页
在读期间发表论文和学术交流情况第91-92页
致谢第92 页

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