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乙酰羟酸合成酶分子体外筛选模型的构建及其与除草剂的相互作用

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乙酰羟酸合成酶分子体外筛选模型的构建及其与除草剂的相互作用
论文目录
 
摘要第10-11 页
Abstract第11-13 页
1 引言第13-23 页
  · 抑制支链氨基酸生物合成途径除草剂靶标的研究进展第13-15 页
  · 利用生物大分子筛选与其作用的活性小分子研究进展第15-19 页
    · 利用生物大分子筛选与其作用的活性小分子的方法第15-16 页
    · 药物与生物大分子相互作用研究进展第16-19 页
  · 除草剂与拟南芥乙酰羟酸合成酶ATAHAS 相互作用的分子机理研究进展第19-21 页
    · AtAHAS 的结构第19-20 页
    · 磺酰脲与咪唑啉酮对AtAHAS 的作用第20-21 页
  · 研究目的和实验内容第21-23 页
    · 研究的目的和意义第21-22 页
    · 课题来源和研究内容第22-23 页
2 实验材料和仪器第23-27 页
  · 供试材料第23 页
  · 基本试剂及生产厂家第23-24 页
    · 拟南芥乙酰羟酸合成酶催化亚基的基因克隆与序列分析材料第23 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基在大肠杆菌中的表达材料第23 页
    · 毕赤酵母表达系统的构建材料第23-24 页
    · 酶活测定与荧光分析材料第24 页
  · 培养基及溶液第24-25 页
  · 仪器与厂家第25-27 页
3 实验方法第27-40 页
  · 拟南芥乙酰羟酸合成酶催化亚基的基因克隆与序列分析第27-31 页
    · 总RNA 提取方法第27 页
    · 总 RNA 质量检测第27 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基cDNA 的合成第27-28 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基cDNA 的扩增第28 页
    · PCR 产物的纯化第28-29 页
    · JM 109 感受态细胞制备第29 页
    · 目的基因与克隆载体的连接及转化第29-30 页
    · 阳性克隆的鉴定第30 页
    · 目的基因的核苷酸序列测定第30-31 页
  · 乙酰羟酸合成酶催化亚基在大肠杆菌中的表达、纯化活性分析第31-34 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基在大肠杆菌中的表达第31-32 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基蛋白的纯化第32-33 页
    · 包涵体复性第33 页
    · 乙酰羟酸合成酶活性分析第33-34 页
  · 乙酰羟酸合成酶在毕赤酵母中的表达及粗酶液活性分析第34-38 页
    · 乙酰羟酸合成酶在毕赤酵母中表达载体的构建第34-36 页
    · 重组质粒的线性化第36-37 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基DNA 电转化法转化毕赤酵母第37-38 页
    · AHAS 在毕赤酵母中的诱导表达第38 页
    · 培养基中粗酶活性测定第38 页
  · 乙酰羟酸合成酶农药先导化合物筛选方法的建立第38-40 页
    · 通过酶活性测方法筛选农药先导化合物第38-39 页
    · 荧光法筛选农药先导化合物第39-40 页
4 结果与分析第40-64 页
  · 乙酰羟酸合成酶催化亚基 cDNA 的克隆与序列分析第40-46 页
    · 总RNA 质量检测第40 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基cDNA 的扩增第40-41 页
    · 阳性克隆PCR 的鉴定第41-42 页
    · 基因测序与序列提交第42-45 页
    · 同源性分析第45 页
    · 乙酰羟酸合成酶软件预测分析第45-46 页
  · 乙酰羟酸合成酶催化亚基的原核表达第46-49 页
    · 表达载体构建所需的乙酰羟酸合成酶催化亚基基因的获取第46 页
    · 重组质粒转化JM109 后的菌落PCR 鉴定及质粒酶切鉴定第46-47 页
    · 乙酰羟酸合成酶催化亚基重组蛋白的SDS-PAGE 检测第47-48 页
    · 重组蛋白可溶性、纯化及复性的SDS-PAGE 检测第48-49 页
  · 乙酰羟酸合成酶的真核表达第49-53 页
    · 表达载体构建所需的乙酰羟酸合成酶催化亚基基因的获取第49 页
    · 载体与目的基因连接方向鉴定第49-50 页
    · 重组载体的酶切鉴定第50 页
    · 重组质粒转化毕赤酵母的鉴定第50-52 页
    · 9K-AHAS 基因的诱导表达第52-53 页
  · 乙酰羟酸合成酶活性测定第53-54 页
    · 标准曲线的绘制第53-54 页
    · 大肠杆菌表达产物复性后酶活测定结果第54 页
    · 酵母表达培养基上清粗酶活性测定结果第54 页
  · 乙酰羟酸合成酶与两种农药及农药单嘧磺隆中间体的相互作用第54-59 页
    · 三维荧光光谱第54-55 页
    · 氯嘧磺隆对乙酰羟酸合成酶的荧光猝灭第55-57 页
    · 氯嘧磺隆与乙酰羟酸合成酶的表观结合常数KA 以及结合位点数n第57-58 页
    · 氯嘧磺隆与乙酰羟酸合成酶上结合位置的求取第58-59 页
  · 乙酰羟酸合成酶与咪草烟的相互作用第59-62 页
    · 咪草烟对乙酰羟酸合成酶的荧光猝灭第59-60 页
    · 咪草烟与乙酰羟酸合成酶的表观结合常数KA以及结合位点数n第60-61 页
    · 咪草烟与乙酰羟酸合成酶上结合位置的求取第61-62 页
  · 乙酰羟酸合成酶与药物单嘧磺隆中间体的作用第62-64 页
5 讨论第64-67 页
  · 乙酰羟酸合成酶基因催化亚基的克隆第64 页
  · 乙酰羟酸合成酶基因催化亚基的原核表达与纯化第64 页
  · 乙酰羟酸合成酶基因催化亚基的真核表达第64-65 页
  · 乙酰羟酸合成酶重组蛋白活性测定第65-66 页
  · 乙酰羟酸合成酶农药先导化合物筛选方法的建立与验证第66-67 页
6 结论第67-68 页
致谢第68-69 页
参考文献第69-74 页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第74页

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