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猪流行性腹泻病毒抗原基因COE的原核表达与纯化

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猪流行性腹泻病毒抗原基因COE的原核表达与纯化
论文目录
 
致谢第1-8页
摘要第8-9页
1 文献综述第9-16页
  · 简介第9-10页
    · 猪流行性腹泻病简介第9页
    · 临床症状第9页
    · 发病原因第9页
    · 病理变化第9-10页
    · 诊断方法第10页
  · PEDV的基因组结构与复制第10-11页
    · PEDV基因组结构第10页
    · PEDV基因组复制第10-11页
  · PEDV基因组编码的蛋白及其功能第11-12页
    · 非结构蛋白及其功能第11页
    · 结构蛋白及其功能第11-12页
  · PEDV表面抗原蛋白表达与纯化方面的研究第12-13页
  · PEDV疫苗的研究进展和发展前景第13-14页
    · 传统疫苗第13页
    · 基因工程疫苗第13-14页
    · 联苗第14页
    · 发展前景第14页
  · 本实验研究的目的与意义第14-16页
2 引言第16-17页
3 材料第17-19页
  · 仪器设备第17页
  · 病料、菌种、质粒第17页
  · 主要试剂第17页
  · 部分试剂与培养基的配置第17-19页
4 方法第19-29页
  · 引物的设计第19页
  · 病毒RNA的提取第19页
  · RT-PCR第19-20页
  · PCR产物回收第20页
  · 连接第20-21页
  · 连接产物的转化第21-23页
    · JM109感受态细胞的制备第21页
    · 转化第21页
    · PMD19-T-COE连接载体的鉴定第21-23页
      · PCR鉴定第21-22页
      · 双酶切鉴定第22-23页
      · PMD19-T-COE质粒的测序第23页
  · 表达载体的构建第23-24页
    · 分别对质粒PMD19-T-COE和原核表达载体PET-32a进行双酶切第23页
    · 重组质粒PET-32a-COE转化到BL21(DE3)p Lys S细胞及鉴定第23-24页
  · HIS-COE蛋白的表达及鉴定第24-27页
    · 诱导表达第24页
    · SDS-PAGE第24-25页
      · 菌液样品的处理第24-25页
      · 灌制蛋白胶第25页
      · 考马斯亮蓝染色第25页
    · 蛋白质表达条件的优化第25-27页
      · IPTG浓度的优化第25-26页
      · 诱导时间的优化第26页
      · 表达蛋白可溶性鉴定第26-27页
  · 包涵体的纯化与复性第27-29页
    · 样品的制备第27页
    · 样品预处理第27页
    · 柱子的制备第27页
    · 透析袋的处理第27页
    · 过柱纯化第27-28页
    · 复性第28页
    · western blot第28-29页
      · 电泳与转膜第28页
      · 封闭和一抗的孵育第28页
      · 二抗的孵育和显影第28-29页
5 结果与分析第29-40页
  · COE基因扩增第29页
  · 重组质粒PMD19-T-COE的鉴定与分析第29-31页
    · 菌液PCR鉴定第29-30页
    · 重组质粒PMD19-T-COE的双酶切鉴定第30-31页
    · 重组质粒PMD19-T-COE的鉴定结果分析第31页
  · COE基因测序结果与分析第31-33页
    · COE基因测序结果第31-33页
    · PEDV-COE基因测序比对结果分析第33页
  · 重组质粒PET-32A-COE的鉴定与分析第33-35页
    · 菌液PCR鉴定第33-34页
    · 双酶切鉴定重组质粒PET-32a-COE第34-35页
    · 重组质粒PET-32a-COE的鉴定结果分析第35页
  · SDS-PAGE鉴定结果与分析第35-39页
    · 重组菌BL21(DE3)p Lys S/PET-32a-COE的SDS-PAGE第35-36页
    · 重组蛋白HIS-COE诱导条件的优化第36-37页
      · 诱导时间的优化第36-37页
      · IPTG浓度诱导优化第37页
    · 重组蛋白HIS-COE可溶性分析第37-38页
    · HIS-COE蛋白的纯化第38页
    · SDS-PAGE鉴定结果分析第38-39页
  · HIS-COE蛋白WESTERN BLOT结果与分析第39-40页
    · HIS-COE蛋白western blot结果第39页
    · HIS-COE蛋白western blot结果的分析第39-40页
6 结论与讨论第40-41页
参考文献第41-47页
英文摘要第47-48页

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