论文目录 | |
致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
1 文献综述 | 第9-16页 |
· 简介 | 第9-10页 |
· 猪流行性腹泻病简介 | 第9页 |
· 临床症状 | 第9页 |
· 发病原因 | 第9页 |
· 病理变化 | 第9-10页 |
· 诊断方法 | 第10页 |
· PEDV的基因组结构与复制 | 第10-11页 |
· PEDV基因组结构 | 第10页 |
· PEDV基因组复制 | 第10-11页 |
· PEDV基因组编码的蛋白及其功能 | 第11-12页 |
· 非结构蛋白及其功能 | 第11页 |
· 结构蛋白及其功能 | 第11-12页 |
· PEDV表面抗原蛋白表达与纯化方面的研究 | 第12-13页 |
· PEDV疫苗的研究进展和发展前景 | 第13-14页 |
· 传统疫苗 | 第13页 |
· 基因工程疫苗 | 第13-14页 |
· 联苗 | 第14页 |
· 发展前景 | 第14页 |
· 本实验研究的目的与意义 | 第14-16页 |
2 引言 | 第16-17页 |
3 材料 | 第17-19页 |
· 仪器设备 | 第17页 |
· 病料、菌种、质粒 | 第17页 |
· 主要试剂 | 第17页 |
· 部分试剂与培养基的配置 | 第17-19页 |
4 方法 | 第19-29页 |
· 引物的设计 | 第19页 |
· 病毒RNA的提取 | 第19页 |
· RT-PCR | 第19-20页 |
· PCR产物回收 | 第20页 |
· 连接 | 第20-21页 |
· 连接产物的转化 | 第21-23页 |
· JM109感受态细胞的制备 | 第21页 |
· 转化 | 第21页 |
· PMD19-T-COE连接载体的鉴定 | 第21-23页 |
· PCR鉴定 | 第21-22页 |
· 双酶切鉴定 | 第22-23页 |
· PMD19-T-COE质粒的测序 | 第23页 |
· 表达载体的构建 | 第23-24页 |
· 分别对质粒PMD19-T-COE和原核表达载体PET-32a进行双酶切 | 第23页 |
· 重组质粒PET-32a-COE转化到BL21(DE3)p Lys S细胞及鉴定 | 第23-24页 |
· HIS-COE蛋白的表达及鉴定 | 第24-27页 |
· 诱导表达 | 第24页 |
· SDS-PAGE | 第24-25页 |
· 菌液样品的处理 | 第24-25页 |
· 灌制蛋白胶 | 第25页 |
· 考马斯亮蓝染色 | 第25页 |
· 蛋白质表达条件的优化 | 第25-27页 |
· IPTG浓度的优化 | 第25-26页 |
· 诱导时间的优化 | 第26页 |
· 表达蛋白可溶性鉴定 | 第26-27页 |
· 包涵体的纯化与复性 | 第27-29页 |
· 样品的制备 | 第27页 |
· 样品预处理 | 第27页 |
· 柱子的制备 | 第27页 |
· 透析袋的处理 | 第27页 |
· 过柱纯化 | 第27-28页 |
· 复性 | 第28页 |
· western blot | 第28-29页 |
· 电泳与转膜 | 第28页 |
· 封闭和一抗的孵育 | 第28页 |
· 二抗的孵育和显影 | 第28-29页 |
5 结果与分析 | 第29-40页 |
· COE基因扩增 | 第29页 |
· 重组质粒PMD19-T-COE的鉴定与分析 | 第29-31页 |
· 菌液PCR鉴定 | 第29-30页 |
· 重组质粒PMD19-T-COE的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
· 重组质粒PMD19-T-COE的鉴定结果分析 | 第31页 |
· COE基因测序结果与分析 | 第31-33页 |
· COE基因测序结果 | 第31-33页 |
· PEDV-COE基因测序比对结果分析 | 第33页 |
· 重组质粒PET-32A-COE的鉴定与分析 | 第33-35页 |
· 菌液PCR鉴定 | 第33-34页 |
· 双酶切鉴定重组质粒PET-32a-COE | 第34-35页 |
· 重组质粒PET-32a-COE的鉴定结果分析 | 第35页 |
· SDS-PAGE鉴定结果与分析 | 第35-39页 |
· 重组菌BL21(DE3)p Lys S/PET-32a-COE的SDS-PAGE | 第35-36页 |
· 重组蛋白HIS-COE诱导条件的优化 | 第36-37页 |
· 诱导时间的优化 | 第36-37页 |
· IPTG浓度诱导优化 | 第37页 |
· 重组蛋白HIS-COE可溶性分析 | 第37-38页 |
· HIS-COE蛋白的纯化 | 第38页 |
· SDS-PAGE鉴定结果分析 | 第38-39页 |
· HIS-COE蛋白WESTERN BLOT结果与分析 | 第39-40页 |
· HIS-COE蛋白western blot结果 | 第39页 |
· HIS-COE蛋白western blot结果的分析 | 第39-40页 |
6 结论与讨论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-47页 |
英文摘要 | 第47-48页 |