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拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达及纯化

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拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达及纯化
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-10页
第一章 前言第10-21页
  1 生长素结合蛋白ABP1第10-14页
    · ABP1的基因第11-12页
    · ABP1的结构第12页
    · ABP1的作用特点第12页
    · ABP1与生长素的相互作用机制第12-14页
      · ABP1控制细胞分裂和生长素响应基因的表达第12-13页
      · ABP1介导生长素控制的细胞形态建成第13-14页
      · ABP1介导内吞作用第14页
  2 大肠杆菌表达系统第14-20页
    · 大肠杆菌的表达体系第15页
    · 大肠杆菌表达载体的结构第15-16页
    · 大肠杆菌的质粒载体第16-18页
      · pBR322质粒第16-17页
      · pUC8质粒第17页
      · pGEM-Z质粒第17-18页
    · 大肠杆菌高效表达的影响因素第18-20页
      · 载体启动子的选择第18页
      · mRNA的稳定性第18-19页
      · 外源密码子的使用第19页
      · 培养条件的控制第19-20页
  3 本研究的目的与意义第20-21页
第二章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达第21-34页
  1 材料第21-22页
    · 植物材料第21页
    · 质粒和原核表达菌株第21页
    · 工具酶和试剂第21页
    · 本研究所需仪器第21-22页
  2 方法第22-31页
    · ABP1基因cDNA克隆第22-27页
      · 拟南芥RNA提取第22页
      · cDNA第一链的合成第22-23页
      · RT-PCR扩增ABP1cDNA第23页
      · DNA凝胶电泳及扩增产物的回收第23-24页
      · ABP1基因cDNA扩增回收产物与pMD18-T载体的连接第24页
      · Top10感受态的制备第24-25页
      · 大肠杆菌的转化第25页
      · 重组转化子鉴定第25-27页
    · 拟南芥ABP1基因原核表达载体的构建第27-30页
      · 引物的设计第27页
      · PCR扩增第27页
      · ABP1-T与pMD18-T载体的连接第27-28页
      · pMD18-T-ABP1的大肠杆菌转化第28页
      · 重组转化子pMD18-T-ABP1的鉴定第28-30页
      · 构建表达载体第30页
    · 拟南芥ABP1基因的原核表达第30-31页
      · pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第30-31页
  3 结果与分析第31-33页
    · ABP1基因的原核表达第31-33页
      · ABP1基因的cDNA克隆第31页
      · 原核表达载体pGEX4T-1-ABP1的酶切鉴定第31-32页
      · pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第32-33页
  4 讨论第33-34页
第三章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的蛋白纯化第34-43页
  1 材料第34页
    · 菌株材料第34页
    · 试剂第34页
    · 仪器第34页
  2 方法第34-37页
    · ABP1融合蛋白表达形式的鉴定第34-35页
    · ABP1蛋白原核表达的条件优化第35页
    · ABP1融合蛋白的纯化第35-37页
      · 大规模诱导融合蛋白的表达第35-36页
      · 大肠杆菌细胞的破碎第36页
      · GST珠子纯化蛋白第36页
      · 融合蛋白的检测第36-37页
    · 目的蛋白质浓度的测定第37页
  3 结果与分析第37-42页
    · ABP1蛋白表达形式的鉴定第37-38页
    · 诱导表达条件的优化第38-40页
      · 诱导时间的确定第38页
      · 诱导温度的确定第38-39页
      · 诱导剂浓度的确定第39-40页
    · ABP1蛋白的纯化第40页
    · 蛋白质浓度的测定第40-42页
      · 工作液的配制第41页
      · BCA标准品和样品的准备第41页
      · 样品处理第41页
      · 样品与标准品吸光值的测定第41页
      · 标准曲线的制作及蛋白质浓度的计算第41-42页
  4 讨论第42-43页
第四章 全文总结第43-44页
  1 论文小结第43页
  2 后续设想第43-44页
参考文献第44-50页
致谢第50-51页
作者简介第51页

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