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拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达及纯化
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拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达及纯化
论文目录
摘要
第1-5页
Abstract
第5-10页
第一章 前言
第10-21页
1 生长素结合蛋白ABP1
第10-14页
· ABP1的基因
第11-12页
· ABP1的结构
第12页
· ABP1的作用特点
第12页
· ABP1与生长素的相互作用机制
第12-14页
· ABP1控制细胞分裂和生长素响应基因的表达
第12-13页
· ABP1介导生长素控制的细胞形态建成
第13-14页
· ABP1介导内吞作用
第14页
2 大肠杆菌表达系统
第14-20页
· 大肠杆菌的表达体系
第15页
· 大肠杆菌表达载体的结构
第15-16页
· 大肠杆菌的质粒载体
第16-18页
· pBR322质粒
第16-17页
· pUC8质粒
第17页
· pGEM-Z质粒
第17-18页
· 大肠杆菌高效表达的影响因素
第18-20页
· 载体启动子的选择
第18页
· mRNA的稳定性
第18-19页
· 外源密码子的使用
第19页
· 培养条件的控制
第19-20页
3 本研究的目的与意义
第20-21页
第二章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达
第21-34页
1 材料
第21-22页
· 植物材料
第21页
· 质粒和原核表达菌株
第21页
· 工具酶和试剂
第21页
· 本研究所需仪器
第21-22页
2 方法
第22-31页
· ABP1基因cDNA克隆
第22-27页
· 拟南芥RNA提取
第22页
· cDNA第一链的合成
第22-23页
· RT-PCR扩增ABP1cDNA
第23页
· DNA凝胶电泳及扩增产物的回收
第23-24页
· ABP1基因cDNA扩增回收产物与pMD18-T载体的连接
第24页
· Top10感受态的制备
第24-25页
· 大肠杆菌的转化
第25页
· 重组转化子鉴定
第25-27页
· 拟南芥ABP1基因原核表达载体的构建
第27-30页
· 引物的设计
第27页
· PCR扩增
第27页
· ABP1-T与pMD18-T载体的连接
第27-28页
· pMD18-T-ABP1的大肠杆菌转化
第28页
· 重组转化子pMD18-T-ABP1的鉴定
第28-30页
· 构建表达载体
第30页
· 拟南芥ABP1基因的原核表达
第30-31页
· pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达
第30-31页
3 结果与分析
第31-33页
· ABP1基因的原核表达
第31-33页
· ABP1基因的cDNA克隆
第31页
· 原核表达载体pGEX4T-1-ABP1的酶切鉴定
第31-32页
· pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达
第32-33页
4 讨论
第33-34页
第三章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的蛋白纯化
第34-43页
1 材料
第34页
· 菌株材料
第34页
· 试剂
第34页
· 仪器
第34页
2 方法
第34-37页
· ABP1融合蛋白表达形式的鉴定
第34-35页
· ABP1蛋白原核表达的条件优化
第35页
· ABP1融合蛋白的纯化
第35-37页
· 大规模诱导融合蛋白的表达
第35-36页
· 大肠杆菌细胞的破碎
第36页
· GST珠子纯化蛋白
第36页
· 融合蛋白的检测
第36-37页
· 目的蛋白质浓度的测定
第37页
3 结果与分析
第37-42页
· ABP1蛋白表达形式的鉴定
第37-38页
· 诱导表达条件的优化
第38-40页
· 诱导时间的确定
第38页
· 诱导温度的确定
第38-39页
· 诱导剂浓度的确定
第39-40页
· ABP1蛋白的纯化
第40页
· 蛋白质浓度的测定
第40-42页
· 工作液的配制
第41页
· BCA标准品和样品的准备
第41页
· 样品处理
第41页
· 样品与标准品吸光值的测定
第41页
· 标准曲线的制作及蛋白质浓度的计算
第41-42页
4 讨论
第42-43页
第四章 全文总结
第43-44页
1 论文小结
第43页
2 后续设想
第43-44页
参考文献
第44-50页
致谢
第50-51页
作者简介
第51页
本篇论文共
51
页,
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