论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第1章 综述 | 第12-20页 |
| 1.1 植物microRNAs的概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 植物microRNAs (miRNA)的生物合成 | 第12页 |
| 1.1.2 植物miRNA的作用机制 | 第12页 |
| 1.1.3 植物miRNA的生物功能 | 第12-13页 |
| 1.1.4 植物miRNA参与次生代谢调控 | 第13-14页 |
| 1.1.5 植物miRNA的研究方法 | 第14页 |
| 1.1.6 miRNA靶基因的预测及验证方法 | 第14-15页 |
| 1.2 植物miR408的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 植物miR408的靶基因 | 第15页 |
| 1.2.2 植物miR408的功能 | 第15-16页 |
| 1.3 小RNA介导的基因沉默技术在植物体中的应用 | 第16-19页 |
| 1.3.1 pMDC123SB-AtMIR390a-B/c载体的构建 | 第17页 |
| 1.3.2 融合表达载体的构建 | 第17-18页 |
| 1.3.3 融合表达载体中amiRNA在植物中的功能 | 第18-19页 |
| 1.4 丹参的研究现状 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 丹参miR408前体序列的克隆及表达分析 | 第20-26页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 材料处理 | 第21页 |
| 2.2.2 核酸提取 | 第21页 |
| 2.2.3 丹参miR408前体序列的克隆 | 第21页 |
| 2.2.4 Sm-MIR408基因的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2.2.5 Sm-MIR408在不同器官中的表达分析 | 第22页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第22-25页 |
| 2.3.1 Sm-MIR408基因的克隆 | 第22-23页 |
| 2.3.2 Sm-MIR408生物信息学分析 | 第23-25页 |
| 2.3.3 Sm-MIR408在不同器官的相对表达水平 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第3章 丹参miR408启动子区的克隆及表达调控模式研究 | 第26-40页 |
| 3.1 实验材料、试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 菌株和载体 | 第26-27页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 丹参miR408启动了区的克隆 | 第27页 |
| 3.2.2 丹参miR408启动子区的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.2.3 丹参miR408前体序列在不同处理条件下的表达分析 | 第28页 |
| 3.2.4 丹参miR408启动子表达载体构建 | 第28-29页 |
| 3.2.5 农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草 | 第29页 |
| 3.2.6 转基因株系的检测 | 第29-30页 |
| 3.2.7 不同处理条件下转基因烟草的GUS活性检测 | 第30页 |
| 3.2.8 转基因T1代烟草植株的检测 | 第30-31页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第31-38页 |
| 3.3.1 丹参miR408启动子区的克隆 | 第31页 |
| 3.3.2 丹参miR408启动子区的生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 3.3.3 丹参miR408前体序列在不同处理条件下的表达分析 | 第33-35页 |
| 3.3.4 丹参miR408启动子表达载体构建及农杆菌转化烟草 | 第35页 |
| 3.3.5 转基因株系的检测 | 第35-36页 |
| 3.3.6 不同处理条件下转基因烟草的GUS活性检测 | 第36-37页 |
| 3.3.7 转基因T1代烟草植株的检测 | 第37-38页 |
| 3.4 结论 | 第38-40页 |
| 第4章 Sm-MIR408过表达转基因烟草的获得 | 第40-48页 |
| 4.1 实验材料、试剂 | 第40页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 菌株和载体 | 第40页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 Sm-MIR408基因过表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草 | 第41-42页 |
| 4.2.3 转基因株系DNA水平的检测 | 第42页 |
| 4.2.4 转基因株系转录水平的检测 | 第42-43页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.3.1 Sm-MIR408基因过表达载体的构建及农杆菌转化烟草 | 第43-44页 |
| 4.3.2 转基因株系DNA水平的检测 | 第44-45页 |
| 4.3.3 转基因株系转录水平的检测 | 第45-46页 |
| 4.3.4 过表达烟草中miR408靶基因表达水平的检测 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第5章 Sm-MIR408在丹参中的干涉研究 | 第48-66页 |
| 5.1 实验材料、试剂 | 第48-49页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 载体 | 第48页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第48-49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-55页 |
| 5.2.1 Sm-MIR408基因干涉载体的构建 | 第49-50页 |
| 5.2.2 农杆菌介导的叶盘转化法转化丹参 | 第50页 |
| 5.2.3 转基因株系分子水平的检测及表型观察 | 第50-51页 |
| 5.2.4 丹参miR408靶基因预测及初步验证 | 第51页 |
| 5.2.5 转基因株系总酚总黄酮含量的测定 | 第51-52页 |
| 5.2.6 转基因植株次生代谢产物含量的测定 | 第52-54页 |
| 5.2.7 转基因株系次生代谢途径中各关键酶基因的表达分析 | 第54-55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-64页 |
| 5.3.1 Sm-MIR408基因干涉载体的构建及农杆菌转化丹参 | 第55页 |
| 5.3.2 转基因株系分子水平的检测及表型观察 | 第55-57页 |
| 5.3.3 丹参miR408靶基因预测及初步验证 | 第57-59页 |
| 5.3.4 转基因株系总酚酸、总黄酮含量的测定 | 第59-60页 |
| 5.3.5 转基因植株次生代谢产物含量的测定 | 第60-61页 |
| 5.3.6 转基因株系次生代谢途径中各关键酶基因的表达分析 | 第61-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第6章 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第80页 |
