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重组解脂亚罗酵母合成微生物油脂的研究

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重组解脂亚罗酵母合成微生物油脂的研究
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
缩略表第7-12页
第1章 绪论第12-28页
  1.1 微生物油脂第12-14页
  1.2 产油微生物第14-17页
    1.2.1 产油细菌第14-15页
    1.2.2 产油藻类第15-16页
    1.2.3 产油霉菌第16页
    1.2.4 产油酵母第16-17页
  1.3 微生物油脂合成机制第17-19页
    1.3.1 脂肪酸的生物合成途径第18-19页
    1.3.2 甘油三酯(TAG)的生物合成途径第19页
  1.4 产油酵母油脂积累的遗传改造第19-22页
    1.4.1 增加脂肪酸合成的前体第20-21页
    1.4.2 过量表达三酰甘油合成的关键酶第21页
    1.4.3 阻断脂肪酸的降解途径第21-22页
  1.5 脂肪酸脱氢酶的研究概况第22-25页
    1.5.1 脂肪酸脱氢酶分类第22-23页
    1.5.2 脱氢酶催化合成不饱和脂肪酸的途径第23-24页
    1.5.3 表达脂肪酸脱氢酶生产特殊脂肪酸第24-25页
  1.6 论文立项依据和研究内容第25-28页
    1.6.1 立题依据第25-26页
    1.6.2 研究内容第26-28页
第2章 构建高产油脂的解脂亚罗酵母菌株第28-54页
  2.1 前言第28页
  2.2 实验材料第28-31页
    2.2.1 质粒和菌株第28-30页
    2.2.2 培养基第30页
    2.2.3 溶液与缓冲液第30页
    2.2.4 酶与生化试剂第30-31页
    2.2.5 仪器和设备第31页
  2.3 试验方法第31-37页
    2.3.1 Y.lipolytica Polf菌株基因组DNA的提取第31-32页
    2.3.2 PCR扩增目的片段第32-33页
    2.3.3 琼脂糖凝胶电泳及目的DNA片段回收第33页
    2.3.4 限制性内切酶酶切及酶切产物连接第33-34页
    2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第34-35页
    2.3.6 酵母转化第35页
    2.3.7 敲除菌株的PCR验证及URA3标记去除第35-36页
    2.3.8 酵母细胞生长的测定第36页
    2.3.9 脂肪酸成分分析第36-37页
  2.4 结果与分析第37-51页
    2.4.1 构建pex10-菌株及其产油特征第37-43页
    2.4.2 构建mfe-菌株及其产油特征第43-46页
    2.4.3 构建pex10-DGA1+菌株及其产油特征第46-49页
    2.4.4 构建YL-AD10 (ACC1~+ DGA1~+pex10~-)菌株及其产油特征第49-51页
  2.5 本章小结第51-54页
第3章 脂肪酸脱氢酶—△9,12,15对油脂积累的影响第54-74页
  3.1 前言第54-55页
  3.2 实验材料第55-57页
    3.2.1 质粒和菌株第55-56页
    3.2.2 培养基第56页
    3.2.3 酶和试剂第56页
    3.2.4 仪器和设备第56-57页
    3.2.5 目的基因第57页
  3.3 试验方法第57-58页
    3.3.1 PCR扩增目的SCD、12D基因第57-58页
    3.3.2 尼罗红染色第58页
    3.3.3 激光共聚焦显微镜第58页
  3.4 结果与分析第58-71页
    3.4.1 游离表达SCD、12D、15D及其产油特征第58-64页
    3.4.2 游离表达12D-SCD及其产油特征第64-67页
    3.4.3 游离表达15D-SCD及其产油特征第67-68页
    3.4.4 游离表达15D-12D及其产油特征第68-71页
  3.5 本章小结第71-74页
第4章 重组菌株YL-12D15DA发酵生产油脂的研究第74-80页
  4.1 前言第74页
  4.2 实验材料第74-75页
    4.2.1 菌株第74页
    4.2.2 培养基第74页
    4.2.3 试剂第74页
    4.2.4 设备第74-75页
  4.3 试验方法第75页
    4.3.1 培养方法第75页
    4.3.2 超临界二氧化碳萃取微生物油脂第75页
  4.4 结果与分析第75-78页
    4.4.1 发酵罐内po1f细胞生长及其产油情况第75-76页
    4.4.2 发酵罐内重组菌株YL-12D15DA细胞生长及其产油情况第76-78页
  4.5 结论第78-80页
第5章 结论与展望第80-82页
  5.1 结论第80-81页
  5.2 展望第81-82页
参考文献第82-92页
致谢第92-94页
攻读学位期间的研究成果第94页

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