论文目录 | |
摘要 | 第1-10
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Abstract | 第10-12
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第一章 前言 | 第12-29
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1 贝类的免疫系统 | 第13-17
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· 细胞免疫 | 第13-15
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· 吞噬作用 | 第14
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· 包囊作用 | 第14
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· 炎症和伤口修复 | 第14-15
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· 体液免疫 | 第15-17
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· 溶酶体酶 | 第15
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· 酚氧化酶原激活系统 | 第15-16
页 |
· 抗菌肽 | 第16
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· 凝集素 | 第16-17
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2 铁蛋白 | 第17-20
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· 铁蛋白的结构及特性 | 第17-19
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· 铁蛋白的生物学功能 | 第19-20
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· 铁离子解毒和储存 | 第19
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· 抗氧化功能 | 第19-20
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· 铁蛋白的其他功能 | 第20
页 |
3 血蓝蛋白 | 第20-27
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· 血蓝蛋白的结构及特性 | 第21-24
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· 血蓝蛋白的功能及分子生物学特性 | 第24-27
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· 血蓝蛋白的载氧功能 | 第24-25
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· 血蓝蛋白的酚氧化酶活性 | 第25-26
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· 血蓝蛋白的免疫学特性 | 第26-27
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· 血蓝蛋白的其它功能 | 第27
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4 本研究的内容、目的和意义 | 第27-29
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第二章 鲍铁蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 | 第29-42
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1 实验材料 | 第29-30
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· 材料 | 第29-30
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· 菌株 | 第29
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· 实验兔 | 第29
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· 表达载体 | 第29
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· 酶类及化学试剂 | 第29-30
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2 实验方法 | 第30-36
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· PCR 引物的设计与合成 | 第30
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· 构建 AbFe1、AbFe2 基因的原核表达载体 | 第30-32
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· 双酶切pUCAbFe1、pUCAbFe2 质粒 | 第31
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· 玻璃奶(Banding)回收琼脂糖凝胶中的DNA | 第31-32
页 |
· 目的基因与表达载体连接 | 第32
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· 大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的大量(100ml)制备 | 第32
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· 连接产物转化至感受态细胞(E.coli DH5α) | 第32
页 |
· 快速提取小量质粒DNA 及双酶切鉴定重组子 | 第32-33
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· 测序分析及构建分子进化树 | 第33
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· 测序分析 | 第33
页 |
· 构建分子进化树 | 第33
页 |
· 诱导目的基因在大肠杆菌BL21、Rosetta 中表达 | 第33-34
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· 将重组阳性质粒转化到表达宿主菌BL21、Rosetta 中 | 第33
页 |
· IPTG 诱导表达目的蛋白 | 第33
页 |
· 菌液PCR 鉴定目的基因 | 第33-34
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· 配制12% SDS-PAGE 蛋白分离凝胶 | 第34
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· 制备AbFe1、AbFe2 蛋白的抗血清 | 第34-35
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· Western blot 检测抗体 | 第35-36
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3 结果与分析 | 第36-41
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· BamHI 和XhoI 双酶切获得目的基因片段 | 第36-37
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· 构建pET-b 系列表达载体 | 第37
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· 重组子的筛选及鉴定 | 第37
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· 测序结果与序列分析 | 第37
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· AbFe1、AbFe2 的分子进化树分析 | 第37
页 |
· IPTG 诱导表达 pET28bAbFe1、 pET22bAbFe2 的蛋白 | 第37-41
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· 菌液PCR 鉴定表达菌液中AbFe1、AbFe2 的基因片段 | 第37-38
页 |
· SDS-PAGE 分析 pET28bAbFe1、 pET22bAbFe2 融合蛋白 | 第38-39
页 |
· AbFe1、AbFe2 抗血清的制备 | 第39
页 |
· Western blot 检测抗体的特异性 | 第39-41
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4 小结 | 第41-42
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第三章 鲍血蓝蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第42-54
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1 实验材料 | 第42
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· 材料 | 第42
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2 实验方法 | 第42-47
页 |
· PCR 引物的设计与合成 | 第42
页 |
· 原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第42-43
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· 双酶切pMD18TAbHc1d、pUCAbHc1h 质粒 | 第43
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· 筛选和鉴定重组质粒 | 第43
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· 序列测定与分析 | 第43
页 |
· AbH1d、AbH1h 基因 BL21、Rosetta 中表达 | 第43
页 |
· 制备表达目蛋白的抗血清 | 第43
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· Bradford 法测定蛋白质含量 | 第43-44
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· 电洗脱回收目的蛋白条带 | 第43-44
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· 制作蛋白质的标准曲线 | 第44
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· 纯化多克隆抗血清 | 第44-45
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· 饱和硫酸铵分级纯化抗体 | 第44-45
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· 宿主菌的丙酮提取物纯化抗体 | 第45
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· 竞争ELISA | 第45-47
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· 筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第45-46
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· 竞争ELISA | 第46-47
页 |
3 结果与分析 | 第47-53
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· 构建原核表达载体 | 第47
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· 重组子的筛选及鉴定 | 第47-48
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· AbH1d、AbH1h 测序结果比对 | 第48
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· pET28AbH1d、pET21AbH1h 的原核表达 | 第48-49
页 |
· 抗血清的制备及Western blot | 第49-50
页 |
· BSA 蛋白浓度的测定及制作标准曲线 | 第50
页 |
· 纯化多克隆抗体 | 第50-51
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· ELISA 筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第51-52
页 |
· 竞争ELISA | 第52-53
页 |
4 小结 | 第53-54
页 |
第四章 讨论 | 第54-57
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· pET 系统表达融合蛋白 | 第54
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· 抗体的制备 | 第54-55
页 |
· 纯化抗血清 | 第55
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· Bradford 法测定蛋白质含量 | 第55-56
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· ELISA 筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第56
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· Western blot | 第56
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· 全文小结 | 第56-57
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参考文献 | 第57-62
页 |
附录Ⅰ基因序列 | 第62-64
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附录Ⅱ载体图 | 第64-67
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致谢 | 第67页 |