论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 TAMs(tumor-associated macrophages) | 第15-20页 |
| 1.1.1 TAMs的来源及分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 TAMs的活化 | 第16页 |
| 1.1.3 TAMs促进肿瘤发展的机制 | 第16-18页 |
| 1.1.4 TAMs与相关信号通路 | 第18-19页 |
| 1.1.5 TAMs的靶向治疗 | 第19-20页 |
| 1.2 长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA) | 第20-23页 |
| 1.2.1 LncRNA的概述及分类 | 第20-21页 |
| 1.2.2 LncRNA的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.2.3 LncRNA在炎症中的作用 | 第22-23页 |
| 1.3 研究目的、研究方法、实验设计及意义 | 第23-26页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第23页 |
| 1.3.2 研究方法 | 第23页 |
| 1.3.3 实验设计 | 第23-25页 |
| 1.3.4 实验意义 | 第25-26页 |
| 第二章 肿瘤微环境调控巨噬细胞lincRNA-p21 表达的改变 | 第26-39页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第26-29页 |
| 2.1.1 实验细胞株和实验动物 | 第26-27页 |
| 2.1.2 实验仪器和耗材 | 第27页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 FVB/N-Tg(MMTV-PyVT)/Nju自发乳腺癌小鼠乳腺肿瘤组织玻片免疫荧光 | 第29页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2.3 LncRNA表达芯片的检测与分析 | 第30页 |
| 2.2.4 LncRNA表达水平的检测 | 第30-32页 |
| 2.2.5 RAW264.7 的转染及转染效率的检测 | 第32页 |
| 2.2.6 统计学分析与图像 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-37页 |
| 2.3.1 小鼠乳腺癌组织中浸润巨噬细胞的检测 | 第33页 |
| 2.3.2 LncRNA在正常巨噬细胞和肿瘤上清处理的巨噬细胞中的差异表达 | 第33-35页 |
| 2.3.3 LincRNA-p21在4T1 肿瘤上清处理过的RAW264.7 中高表达 | 第35-36页 |
| 2.3.4 RAW264.7 转染si-lincRNA-p21 后转染效率的验证 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 LincRNA-p21 表达下调对巨噬细胞的影响 | 第39-52页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第39-42页 |
| 3.1.1 实验细胞株及实验动物 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器与耗材 | 第39-40页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 CCK-8 检测细胞增殖 | 第42页 |
| 3.2.2 FCM检测转染后巨噬细胞表面标记的改变 | 第42-43页 |
| 3.2.3 FCM检测敲减lincRNA-p21后RAW264.7 的凋亡情况 | 第43页 |
| 3.2.4 ELISA检测敲减lincRNA-p21后RAW264.7 分泌谱的改变 | 第43-44页 |
| 3.2.5 RAW264.7 吞噬功能的检测 | 第44页 |
| 3.2.6 小鼠脾脏组织单核细胞的分离 | 第44-45页 |
| 3.2.7 Western-blot检测敲减lincRNA-p21的RAW264.7中Arg-1和iNOS的表达情况 | 第45-47页 |
| 3.2.8 统计学方法 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-50页 |
| 3.3.1 敲低lincRNA-p21对RAW264.7 增殖的影响 | 第47页 |
| 3.3.2 敲低lincRNA-p21 对巨噬细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.3 敲低lincRNA-p21对RAW264.7 表达表面标记的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.4 敲低lincRNA-p21对RAW264.7 分泌谱的影响 | 第49页 |
| 3.3.5 敲低lincRNA-p21对RAW264.7 表达Arg-1和iNOS蛋白的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.6 敲低lincRNA-p21对RAW264.7 吞噬功能的影响 | 第50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 敲低lincRNA-p21 的巨噬细胞对肿瘤细胞的影响 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验细胞株 | 第52页 |
| 4.1.2 实验仪器和耗材 | 第52-53页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第53页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 CCK-8 检测细胞增殖 | 第53页 |
| 4.2.2 FCM检测肿瘤细胞与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后的凋亡情况 | 第53页 |
| 4.2.3 FCM检测肿瘤细胞与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后巨噬细胞表面FasL和肿瘤细胞表面Fas的表达情况 | 第53页 |
| 4.2.4 FCM检测肿瘤细胞与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后巨噬细胞ROS的表达情况 | 第53-54页 |
| 4.2.5 Transwell检测与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后肿瘤细胞迁移能力的变化 | 第54页 |
| 4.2.6 划痕实验检测与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后肿瘤细胞侵袭能力的变化 | 第54-55页 |
| 4.2.7 统计学方法 | 第55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-59页 |
| 4.3.1 与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后肿瘤细胞增殖的变化 | 第55页 |
| 4.3.2 与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后肿瘤细胞凋亡情况 | 第55-56页 |
| 4.3.3 与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后肿瘤细胞迁移能力的变化 | 第56-58页 |
| 4.3.4 与敲减lincRNA-p21的RAW264.7 共培养后对肿瘤细胞侵袭能力的变化 | 第58页 |
| 4.3.5 肿瘤细胞与转染RAW264.7 共培养后对巨噬细胞表达ROS及表面标记FasL和肿瘤细胞表达Fas的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 巨噬细胞lincRNA-p21 表达下调对小鼠乳腺癌移植瘤的生长的影响及其机制 | 第60-73页 |
| 5.1 实验材料和仪器 | 第60-62页 |
| 5.1.1 实验细胞株和实验动物 | 第60页 |
| 5.1.2 实验仪器和耗材 | 第60-61页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.2.1 小鼠4T1 乳腺癌皮下移植瘤的建立 | 第62-63页 |
| 5.2.2 转染后RAW264.7 处理小鼠4T1 乳腺癌移植瘤模型 | 第63页 |
| 5.2.3 小鼠生存状况的检测、小鼠肿瘤体积的检测及小鼠肿瘤重量的检测 | 第63页 |
| 5.2.4 FCM分选荷瘤小鼠肿瘤组织中TAMs | 第63-64页 |
| 5.2.5 小鼠脾脏组织单核细胞的分离 | 第64页 |
| 5.2.6 小鼠脾脏组织及肿瘤组织中巨噬细胞lincRNA-p21 表达水平的检测 | 第64页 |
| 5.2.7 Western-blot检测敲减lincRNA-p21的RAW264.7 下游相关蛋白及相关信号通路的表达情况 | 第64页 |
| 5.2.8 FISH探针检测lincRNA-p21与p53及MDM2 相互作用的情况 | 第64-65页 |
| 5.2.9 统计学分析与图像 | 第65页 |
| 5.3 实验结果 | 第65-72页 |
| 5.3.1 原代脾脏巨噬细胞及TAMs中 lincRNA-p21 的表达 | 第65-66页 |
| 5.3.2 巨噬细胞lincRNA-p21 表达的减低对荷瘤小鼠皮下瘤发展的影响 | 第66-69页 |
| 5.3.3 巨噬细胞lincRNA-p21 表达的减低对其相互作用蛋白及其下游相关蛋白以及相关信号通路蛋白表达的影响 | 第69-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 主要结论 | 第73页 |
| 6.2 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第71-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第85页 |
