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棉花GhGME基因的克隆及其表达分析

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棉花GhGME基因的克隆及其表达分析
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-9页
缩略词表第9-11页
第一章 文献综述第11-26页
  · 活性氧简介第11-17页
    · 活性氧的产生机制第11页
    · 活性氧的伤害第11-13页
    · 活性氧的清除第13-17页
  · 植物细胞中抗坏血酸的合成途径第17-19页
  · 植物细胞中抗坏血酸合成过程中相关酶的研究第19-22页
    · GDP-甘露糖焦磷酸化酶第20页
    · GDP-甘露糖-3,5-表异构酶第20页
    · L-半乳糖-1-磷酸酯酶第20-21页
    · L-半乳糖脱氢酶第21页
    · L-半乳糖内酯脱氢酶第21页
    · D-半乳糖醛酸还原酶第21页
    · L-古洛糖-1,4-内酯氧化酶第21-22页
    · 肌醇加氧酶第22页
  · 植物体内抗坏血酸含量与逆境胁迫的关系第22-23页
    · 低温胁迫第22-23页
    · 盐胁迫第23页
    · 激素胁迫第23页
  · GME 基因国内外研究现状第23-24页
  · 本研究的目的和意义第24-26页
第二章 棉花 GhGME 基因克隆及其表达分析第26-47页
  · 前言第26页
  · 实验材料第26-29页
    · 植物材料第26页
    · 菌株和质粒第26页
    · 酶与试剂第26-27页
    · 溶液配方及常用抗生素与激素的配置第27-28页
    · 模板与引物第28-29页
    · 培养基第29页
    · 仪器与设备第29页
  · 实验方法第29-40页
    · GhGME 基因的克隆第29-38页
    · 棉花 GhGME 基因组织特异性表达和胁迫表达分析第38-40页
  · 结果与分析第40-45页
    · 总 RNA 的提取和棉花 GhGME 基因 EST 目的片段的扩增第40-41页
    · 棉花 GhGME 基因克隆第41-42页
    · 棉花 GhGME 基因进化分析第42-44页
    · 棉花 GhGME 基因在根、茎、叶中的表达分析第44页
    · 棉花 GhGME 基因在低温、盐胁迫和 GA3处理下的表达分析第44-45页
  · 讨论第45-47页
第三章 原核表达载体构建及蛋白质表达第47-58页
  · 前言第47页
  · 实验材料第47-49页
    · 菌株与载体第47页
    · 酶与试剂第47页
    · 溶液配方及常用抗生素与激素的配置第47-49页
    · 模板与引物第49页
    · 培养基第49页
    · 仪器与设备第49页
  · 实验方法第49-54页
    · 带有酶切位点的 GhGME 基因(简称原核 GhGME)扩增第49-50页
    · 原核 GhGME 基因克隆到 pGEM-Teasy 上及序列检测第50页
    · pGEM-T-原核 GhGME 质粒提取第50页
    · pGEM-T-原核 GhGME 双酶切及酶切产物回收第50-51页
    · pET-23b 载体双酶切及酶切产物回收第51页
    · 目的基因和表达载体的连接第51-52页
    · 转化感受态大肠杆菌第52页
    · 原核表达载体 pET-23b- GhGME 的酶切鉴定第52-53页
    · 工程菌的制备第53页
    · GhGME 酶蛋白诱导第53页
    · GhGME 酶蛋白分离与纯化第53-54页
  · 结果与分析第54-56页
    · 重组质粒 pGEM-T-原核 GhGME 的构建与分析第54页
    · 原核表达载体 pET-23b- GhGME 的构建与分析第54-55页
    · 工程菌的制备及 PCR 鉴定第55页
    · 重组质粒 pET-23b- GhGME 在大肠杆菌 BL21 中的诱导表达第55-56页
    · GhGME 酶蛋白的纯化第56页
  · 讨论第56-58页
第四章 真核表达载体构建及烟草遗传转化第58-74页
  · 前言第58页
  · 实验材料第58-60页
    · 菌株与载体第58页
    · 酶与试剂第58页
    · 溶液配方及常用抗生素与激素的配置第58页
    · 模板与引物第58-59页
    · 培养基第59-60页
    · 仪器与设备第60页
  · 实验方法第60-67页
    · 带有酶切位点的 GhGME 基因(简称真核 GhGME)扩增第60-61页
    · 真核 GhGME 基因克隆到 pGEM-Teasy 上及序列检测第61页
    · pGEM-T-真核 GhGME 质粒提取第61页
    · pGEM-T-真核 GhGME 双酶切及酶切产物回收第61页
    · pBin438 载体双酶切及酶切产物回收第61页
    · 目的基因和表达载体的连接第61-62页
    · 转化感受态大肠杆菌第62页
    · 真核表达载体 pBin438- GhGME 的酶切鉴定第62页
    · 根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备第62-63页
    · 农杆菌的电击转化第63页
    · 烟草无菌苗的培养第63-64页
    · 烟草转化第64-65页
    · 转基因烟草植株筛选第65-66页
    · 转基因烟草植株抗坏血酸含量测定第66-67页
  · 结果与分析第67-72页
    · 重组质粒 pGEM-T-真核 GhGME 的构建与分析第67-68页
    · 真核表达载体 pBin438- GhGME 的构建与分析第68页
    · 工程菌的制备及 PCR 鉴定第68-69页
    · 烟草转化结果第69-71页
    · 影响转化效率相关因素第71页
    · 转基因烟草苗的抗坏血酸测定第71-72页
  · 讨论第72-74页
第五章 结论第74-75页
参考文献第75-82页
致谢第82-83页
作者简介第83-84页
张宁导师简介第84-85页
吴家和导师简介第85-86页

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