孝顺竹木质素合成关键酶基因的克隆与表达分析

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孝顺竹木质素合成关键酶基因的克隆与表达分析

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孝顺竹木质素合成关键酶基因的克隆与表达分析

论文目录
摘要	第1-6页
Abstract	第6-11页
1 文献综述	第11-23页
· 木质素概述	第11-13页
· 木质素合成关键酶基因国内外研究现状	第13-17页
· 苯丙酸途径上的调控涉及的酶类	第14-15页
· 木质素单体特异合成相关的酶类的研究	第15-16页
· 木质素特异合成途径下游酶类的调控研究	第16-17页
· 竹木质素研究进展	第17-18页
· 木质素单体合成相关酶的主要类型	第18-19页
· 氧化还原酶类	第18-19页
· 转移酶类	第19页
· 裂合酶类	第19页
· 合成酶类	第19页
· cDNA 的3’和5’的RACE 反应概述	第19-23页
2 引言	第23-27页
· 研究背景	第23-24页
· 研究目的和意义	第24页
· 研究内容、目标	第24-26页
· 研究内容	第24页
· 研究目标	第24-26页
· 本研究采用的技术路线	第26-27页
3 材料和方法	第27-44页
· 实验材料	第27页
· 植物材料	第27页
· 实验载体与菌株	第27页
· 实验主要试剂	第27页
· 实验主要仪器设备	第27页
· 实验引物设计	第27-28页
· 孝顺竹 CAD 基因的克隆	第28-36页
· 孝顺竹总RNA 的提取	第28-29页
· 孝顺竹总RNA 的检测	第29页
· 孝顺竹cDNA 的合成	第29-30页
· PCR 反应及琼脂糖电泳	第30-31页
· PCR 扩增目的片段及产物回收	第31页
· 目的片段与 T-载体的连接	第31-32页
· 大肠杆菌感受态细胞制备	第32页
· 重组子转化感受态细胞	第32页
· 碱裂解法提取质粒	第32-33页
· 质粒的酶切鉴定	第33页
· 重组质粒的测序分析	第33页
· RACE(rapid amplification of cDNA ends)法末端片段扩增	第33-35页
· CAD 基因全长的拼接及生物信息学分析	第35-36页
· 组织特异性表达分析	第36页
· CAD 基因过量表达载体构建	第36-38页
· CAD 基因过量表达载体的构建策略	第36-37页
· 重组子的筛选及 PCR 验证	第37-38页
· 过量表达载体转化农杆菌	第38页
· 根癌农杆菌感受态细胞制备	第38页
· 过量表达载体转化农杆菌	第38页
· 原核表达载体pE-SUMO-CAD 的构建	第38-42页
· 原核表达载体pE-SUMO-CAD 构建方法	第38-40页
· 重组子的筛选及酶切验证	第40-41页
·外源基因的诱导表达	第41页
· 外源基因的诱导表达	第41页
· 外源基因表达条件的优化	第41页
· 外源基因所编码蛋白质的SDS-PAGE 分析	第41-42页
· SDS 聚丙烯酰胺凝胶的灌制	第41-42页
· 染色和脱色	第42页
· 孝顺竹4CL、COMT、 CCoAOMT 基因片段的克隆	第42-44页
· 引物设计及PCR 扩增	第42-43页
· 重组、克隆和DNA 序列分析	第43-44页
4 结果与分析	第44-59页
· 实验PCR 引物	第44页
· 孝顺竹材料RNA 提取	第44-45页
· CAD 基因片段的克隆	第45页
· 5’-RACE 和3’-RACE 扩增与分析	第45-46页
· CAD 基因全长的拼接及生物信息学分析	第46-47页
· 基因cDNA 编码区全长的拼接与分析	第46-47页
· 氨基酸序列比较与系统进化树分析	第47页
· 基因在植物不同组织中的表达量分析	第47-50页
· 过量表达载体的构建	第50页
· 外源基因表达蛋白的SDS-PAGE 分析	第50-54页
· 外源基因表达蛋白的SDS-PAGE 分析	第50-51页
· 诱导表达条件的优化	第51-54页
· IPTG 的浓度	第51-52页
· 低温诱导(25℃)	第52-53页
· 培养基的不同pH 值对诱导表达产物的影响	第53-54页
· 4 CL、COMT、 CCoAOMT 基因片段的获得与分析	第54-59页
· 扩增目的片段的引物	第54页
· 目的基因片段的获得	第54-55页
· 氨基酸序列分析	第55-59页
5 讨论与结论	第59-62页
· 讨论	第59-60页
· 结论	第60-62页
参考文献	第62-68页
附录	第68-75页
附录A 中英文缩写与注释	第68-69页
附录B CAD基因GenBank提交序列	第69-71页
附录C 4CL、COMT、CCoAOMT和CAD在NCBI中的BLAST截图	第71-73页
附录D 4CL、COMT、CCoAOMT和CAD的cDNA序列	第73-75页
致谢	第75-76页
作者简介	第76页
在读期间发表的学术论文	第76页

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