论文目录 | |
摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
第一章 综述 | 第12-29页 |
· 小麦基因克隆的概况 | 第12-14页 |
· 小麦基因克隆的方法 | 第12-13页 |
· 小麦重要基因的克隆 | 第13-14页 |
· 小麦产量性状的遗传研究 | 第14-17页 |
· 小麦产量性状的构成因素 | 第14-15页 |
· 小麦粒型与粒重的 QTL 分析 | 第15-17页 |
· 作物产量性状相关 QTL 的分离 | 第17-21页 |
· 分子标记概述 | 第21-23页 |
· 等位基因特异性 PCR(AS-PCR) | 第23-27页 |
· 本研究的目的及意义 | 第27-28页 |
· 本研究的技术路线图 | 第28-29页 |
第二章 小麦粒重基因 TaGW2 的克隆与原核表达 | 第29-50页 |
引言 | 第29页 |
· 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
· 植物材料 | 第29页 |
· 菌株、试剂 | 第29页 |
· 仪器设备 | 第29页 |
· 引物设计与合成 | 第29-30页 |
· 小麦粒重基因 TaGW2 的克隆 | 第30-35页 |
· 基因组 DNA 的提取 | 第30-31页 |
· CTAB 提取液的配制 | 第31页 |
· DNA 的提取 | 第31页 |
· 小麦总 RNA 提取 | 第31-32页 |
· 实验前准备 | 第31页 |
· RNA 抽提步骤(Trizol 法): | 第31-32页 |
· 操作中应该注意的事项 | 第32页 |
· RT-PCR 扩增小麦全长 cDNA | 第32-33页 |
· cDNA 第一链合成 | 第32-33页 |
· 全长 cDNA 扩增 | 第33页 |
· 全长 cDNA 的克隆 | 第33-35页 |
· 目的片段的回收纯化 | 第33-34页 |
· 目的片段与 T 载体连接 | 第34页 |
· 大肠杆菌 DH5a 感受态的制备(CaCl2 法) | 第34页 |
· 连接产物的转化 | 第34-35页 |
· 阳性克隆的筛选与测序 | 第35页 |
· 序列分析 | 第35页 |
· 小麦粒重基因 TaGW2 的原核表达 | 第35-38页 |
· PCR 扩增 | 第35页 |
· 连接 T 载体,转化大肠杆菌感受态,涂板,蓝白斑筛选阳性克隆 | 第35页 |
· 抽提重组 T 质粒(碱裂解法) | 第35-36页 |
· 双酶切回收 | 第36页 |
· PET 载体连接 | 第36-37页 |
· 连接产物转化 DH5a | 第37页 |
· 挑取阳性菌落,抽提表达重组质粒,转化 DE3 表达菌株 | 第37页 |
· TPTG 诱导重组菌的表达 | 第37-38页 |
· 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第38页 |
· 小麦粒重基因 TaGW2 内含子的克隆 | 第38页 |
· 结果与分析 | 第38-48页 |
· 小麦总 RNA 的提取 | 第38-39页 |
· 目的片段的 PCR 扩增 | 第39-40页 |
· 目的基因测序结果 | 第40-43页 |
· TaGW2 基因的结构和功能预测 | 第43-44页 |
· TaGW2 基因突变位点的发现 | 第44-46页 |
· 突变 TaGW2 等位基因原核表达载体的构建及重组子鉴定 | 第46页 |
· 目的基因表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第46-47页 |
· 目的基因内含子的克隆 | 第47-48页 |
· 讨论 | 第48-50页 |
第三章 小麦粒重基因 TaGW2 分子标记的开发与应用 | 第50-64页 |
引言 | 第50页 |
· 实验材料 | 第50页 |
· 小麦粒重基因 TaGW2 的 AS-PCR 引物设计 | 第50-52页 |
· 小麦粒重基因 TaGW2 的 AS-PCR 标记应用 | 第52-53页 |
· 基因组 DNA 的提取 | 第52页 |
· AS-PCR 标记的筛选 | 第52页 |
· 突变位点染色体定位 | 第52页 |
· F2 群体基因型检测 | 第52页 |
· 关联分析 | 第52页 |
· TaGW2 基因染色体上的初定位 | 第52页 |
· AS-PCR 标记在其它品种中的应用 | 第52-53页 |
· 对 AS-PCR 标记的验证 | 第53页 |
· 结果与分析 | 第53-62页 |
· AS-PCR 标记的筛选 | 第53页 |
· 突变位点染色体定位 | 第53-54页 |
· F2 群体基因型检测 | 第54页 |
· 关联分析 | 第54-58页 |
· TaGW2 突变等位基因在染色体上的初步定位 | 第58页 |
· AS-PCR 标记在其它品种中的应用 | 第58-60页 |
· 对 AS-PCR 标记的验证 | 第60-62页 |
· 讨论 | 第62-64页 |
第四章 结论 | 第64-66页 |
参考文献 | 第66-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
作者简介 | 第75页 |