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人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在毕赤酵母中的共表达及其纯化
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人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在毕赤酵母中的共表达及其纯化
论文目录
 
内容提要第1-3 页
英文文摘第3-7 页
序言第7-9 页
第一部分 文献综述第9-31 页
　　1 基因工程制药的研究概况第9-11 页
　　2 骨形态发生蛋白的研究与应用第11-20 页
　　　　· BMPs及其受体第11-13 页
　　　　· BMPs的生物学特性第13-16 页
　　　　· BMPs在临床应用中的研究第16-20 页
　　3 毕赤酵母真核表达系统第20-31 页
　　　　· 几种不同表达体系和毕赤酵母表达系统的特性及比较第20-21 页
　　　　· 毕赤酵母表达系统的特点第21-22 页
　　　　· 影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素第22-31 页
第二部分 材料与方法第31-43 页
　　1 材料第31-34 页
　　　　· 菌株和载体第31 页
　　　　· 工具酶第31 页
　　　　· 其它试剂第31 页
　　　　· 常用培养基和缓冲液第31-33 页
　　　　· 寡聚核甘酸引物第33 页
　　　　· 主要仪器第33-34 页
　　2 实验方法第34-43 页
　　　　· 表达质粒的制备第34-35 页
　　　　· 重组质粒转化酵母感受态细胞第35 页
　　　　· 重组酵母的筛选第35-37 页
　　　　· 重组酵母细胞的诱导表达第37 页
　　　　· 表达产物的鉴定第37-39 页
　　　　· 发酵条件的优化第39-40 页
　　　　· 表达产物的分离纯化第40-41 页
　　　　· 纯化产物的处理第41 页
　　　　· 表达产物的定量分析第41-42 页
　　　　· 纯化蛋白的理化性质检测第42-43 页
第三部分 结果与分析第43-56 页
　　1 表达质粒的制备第43 页
　　2 酵母转化子筛选及鉴定第43-47 页
　　　　· 酵母转化子的筛选工作汇总第43-45 页
　　　　· PCR筛选及鉴定第45-46 页
　　　　· SDS-PAGE鉴定第46 页
　　　　· Dot-Blotting鉴定第46-47 页
　　3 发酵条件的优化第47-52 页
　　　　· 不同初始pH值的培养基对蛋白表达的影响第47-48 页
　　　　· 初始诱导时的菌体密度(诱导OD)对蛋白表达的影响第48-49 页
　　　　· 甲醇诱导时间对蛋白表达的影响第49-51 页
　　　　· 甲醇诱导浓度对蛋白表达的影响第51-52 页
　　4 表达产物的柱层析法纯化第52-53 页
　　5 纯化产物的鉴定第53-54 页
　　　　· SDS-PAGE鉴定第53 页
　　　　· Western Blotting鉴定第53-54 页
　　6 表达产物的定量分析第54-55 页
　　7 纯化产物rhBMP4和rhBMP7的表观特征与溶解性第55-56 页
第四部分 小结与讨论第56-63 页
　　1 菌株表型第56 页
　　2 外源基因第56-59 页
　　3 转化效率第59-60 页
　　4 培养基第60 页
　　5 pH值第60-61 页
　　6 菌体密度第61 页
　　7 甲醇浓度第61 页
　　8 表达量第61-62 页
　　9 糖基化第62-63 页
英文缩略词表第63-64 页
参考文献第64-74 页
中文摘要第74-78 页
致谢第78页

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