论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-10
页 |
| 英文摘要 | 第10-12
页 |
| 1 前言 | 第12-31
页 |
| · 轮状病毒研究概况 | 第12-16
页 |
| · 病毒的基本特性 | 第12-13
页 |
| · 病毒蛋白 | 第13-14
页 |
| · 基因组结构 | 第14-15
页 |
| · RV流行现状 | 第15-16
页 |
| · 轮状病毒疫苗研究进展 | 第16-21
页 |
| · 第一代轮状病毒疫苗-轮状病毒口服减毒活疫苗 | 第16-17
页 |
| · 第二代轮状病毒疫苗-多价重组疫苗 | 第17-18
页 |
| · 第三代轮状病毒疫苗 | 第18-19
页 |
| · 其它进展 | 第19-21
页 |
| · 干扰素研究概况 | 第21-24
页 |
| · 干扰素的研究进展 | 第21-22
页 |
| · 干扰素的分类 | 第22
页 |
| · 干扰素诱导细胞产生的抗病毒翻译途径 | 第22-23
页 |
| · 干扰素可治疗的疾病 | 第23
页 |
| · 干扰素转基因植物的研究情况 | 第23-24
页 |
| · 融合基因研究进展 | 第24-28
页 |
| · 利用融合蛋白对目的基因进行示踪，研究其表达调控特征及生理功能 | 第24-25
页 |
| · 利用融合基因增强目的基因的表达 | 第25-26
页 |
| · 利用融合蛋白改变目的蛋白的免疫原性，产生无毒疫苗 | 第26
页 |
| · 相同或相似功能的基因融合，增强基因的功能 | 第26-28
页 |
| · 轮状病毒中和抗原结合干扰素共同对付轮状病毒腹泻的探讨 | 第28-31
页 |
| 研究的目的和意义 | 第28-30
页 |
| 技术路线 | 第30-31
页 |
| 2 材料和方法 | 第31-55
页 |
| · 材料与试剂 | 第31
页 |
| · 菌种和质粒 | 第31
页 |
| · 目的基因 | 第31
页 |
| · 试剂和药品 | 第31
页 |
| · 植物材料 | 第31
页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第31-45
页 |
| · linker序列与引物的设计 | 第31-32
页 |
| · linker序列 | 第31-32
页 |
| · 引物设计 | 第32
页 |
| · 重组PCR构建VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的模式和原理 | 第32-35
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因构建模式 | 第32
页 |
| · 重组PCR反应原理 | 第32
页 |
| · 重组PCR构建VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的流程图 | 第32
页 |
| · 重组PCR反应体系和反应条件 | 第32-35
页 |
| · 初次PCR | 第33-34
页 |
| · 初次PCR产物的回收 | 第34-35
页 |
| · 重叠延伸反应 | 第35
页 |
| · 重叠延伸反应产物的回收 | 第35
页 |
| · T-载体克隆与鉴定 | 第35-39
页 |
| · 重叠延伸反应产物与T-载体连接 | 第35-36
页 |
| · 宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第36
页 |
| · 连接产物转化宿主菌E.coli DH5α的感受态细胞 | 第36-37
页 |
| · pEGM-T/VP_7-LK-IFN_(a-2b)克隆载体质粒的酶切鉴定 | 第37-39
页 |
| · 重组质粒的提取 | 第37-38
页 |
| · 质粒的纯化 | 第38
页 |
| · 重组质粒的酶切鉴定 | 第38-39
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121植物表达载体的构建 | 第39-41
页 |
| · 线性化pBI121载体的制备 | 第39-40
页 |
| · 线性化载体与VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因片段的连接 | 第40
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121重组载体的筛选 | 第40-41
页 |
| · 重组载体的酶切鉴定 | 第41
页 |
| · 农杆菌工程菌株的构建 | 第41-45
页 |
| · 农杆菌感受态的制备 | 第41-42
页 |
| · 植物表达载体VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121转化农杆菌EHA105 | 第42
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121质粒的农杆菌工程菌的筛选与鉴定 | 第42-45
页 |
| · 农杆菌质粒提取 | 第42-43
页 |
| · 斑点杂交所需试剂的配制 | 第43-44
页 |
| · 探针制备 | 第44
页 |
| · 杂交 | 第44
页 |
| · 洗膜 | 第44-45
页 |
| · 底物反应 | 第45
页 |
| · 植物基因转化 | 第45-49
页 |
| · 培养基 | 第45-46
页 |
| · 外植体来源 | 第46
页 |
| · 组织培养 | 第46
页 |
| · Kan梯度预实验 | 第46
页 |
| · 番茄生根梯度实验 | 第46
页 |
| · 以农杆菌为介导，通过叶盘法将外源基因导入番茄 | 第46-49
页 |
| · 农杆菌侵染液的制备 | 第47
页 |
| · 叶盘法转化番茄 | 第47-49
页 |
| · 转基因植株的鉴定 | 第49-52
页 |
| · 植物总DNA的提取 | 第49-50
页 |
| · PCR鉴定转基因植株 | 第50
页 |
| · PCR-Southern Blot检测 | 第50-52
页 |
| · Southern Blot检测 | 第52
页 |
| · 转基因植物中外源基因表达蛋白的SDS-PAGE | 第52-55
页 |
| · 转基因植物蛋白的提取 | 第52-53
页 |
| · SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第53-54
页 |
| · 考马斯亮蓝染色 | 第54-55
页 |
| 3 结果与分析 | 第55-65
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的构建 | 第55-56
页 |
| · 初次PCR反应 | 第55
页 |
| · 重叠延伸反应 | 第55-56
页 |
| · VP_7-LK-IFN_(a-2d)/pBI121植物表达载体的构建 | 第56
页 |
| · 农杆菌工程菌株的构建 | 第56-57
页 |
| · 番茄的遗传转化 | 第57-62
页 |
| · 不同基因型外植体的再生能力 | 第57-58
页 |
| · 外植体对Kan的敏感性 | 第58-59
页 |
| · 外植体预培养 | 第59
页 |
| · 最佳侵染时间和AS浓度的确定 | 第59-61
页 |
| · 番茄转化植株的筛选 | 第61-62
页 |
| · 番茄遗传转化的检测 | 第62-64
页 |
| · PCR检测和PCR-Southern检测 | 第62-63
页 |
| · Southern blot检测 | 第63-64
页 |
| · 转基因植物表达产物-蛋白质SDS-PAGE分析 | 第64-65
页 |
| 4 结论 | 第65-66
页 |
| 5 讨论 | 第66-69
页 |
| · 关于重组PCR(recombinant PCR)技术 | 第66
页 |
| · 融合蛋白表达的重要性与可行性 | 第66-67
页 |
| · 关于受体植物的选择 | 第67
页 |
| · Southern blot结果与Protein expression的不一致性 | 第67-69
页 |
| 6 参考文献 | 第69-77
页 |
| 7 附录1 | 第77-78
页 |
| 8 附录2 | 第78-82
页 |
| 9 附图 | 第82-86
页 |
| 10 致谢 | 第86页 |
