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拟南芥芥子酶基因TGG5的克隆、表达及酶活特性研究
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拟南芥芥子酶基因TGG5的克隆、表达及酶活特性研究
论文目录
 
摘要第1-5 页
ABSTRACT第5-10 页
1 前言第10-31 页
　　· 拟南芥概述第10-11 页
　　· 芥子酶研究进展第11-19 页
　　　　· 芥子酶概述第11-15 页
　　　　　　· 芥子酶的分布与细胞定位第12 页
　　　　　　· 芥子酶基因及其表达调控第12-14 页
　　　　　　· 芥子酶的活性测定第14-15 页
　　　　　　· 芥子酶在植物以外生物领域的分布第15 页
　　　　· 硫代葡萄糖苷-芥子酶系统概述第15-19 页
　　　　　　· 硫代葡萄糖苷第15-17 页
　　　　　　　　· 硫代葡萄苷的化学结构及分类第15-16 页
　　　　　　　　· 硫代葡萄糖苷的生物合成及其降解第16-17 页
　　　　　　· 硫代葡萄糖苷-芥子酶系统第17-19 页
　　· 基因克隆技术研究进展第19-23 页
　　　　· 图位克隆技术第20-21 页
　　　　· 转座子或T-DNA标签第21 页
　　　　· 同源序列候选基因法第21-22 页
　　　　· 表达序列标签法(EST)第22-23 页
　　　　· 差异表达基因的分离方法第23 页
　　· 毕赤酵母外源基因表达系统研究进展第23-29 页
　　　　· 毕赤酵母表达系统的优缺点第24-25 页
　　　　· 常用表达菌株第25 页
　　　　· 常见的表达载体第25-26 页
　　　　· 转化方法第26 页
　　　　· 毕赤酵母高效表达外源蛋白的策略第26-29 页
　　　　　　· 外源基因自身的特性第26 页
　　　　　　· 选择强启动子第26-27 页
　　　　　　· 增加外源基因整合拷贝数第27 页
　　　　　　· 载体和宿主的选择第27-28 页
　　　　　　· 优化发酵条件第28 页
　　　　　　· 防止目的蛋白降解第28-29 页
　　· 本研究的目的和意义第29-30 页
　　· 技术路线第30-31 页
2 实验材料、试剂及仪器第31-33 页
　　· 植物材料第31 页
　　· 菌株与质粒第31 页
　　· 酶与生化试剂第31 页
　　· 常用培养基第31-32 页
　　· 主要仪器设备第32-33 页
3 实验方法第33-44 页
　　· 拟南芥芥子酶基因ATTGG5的克隆第33-38 页
　　　　· 拟南芥总RNA的提取第33 页
　　　　· cDNA的合成第33-34 页
　　　　· 芥子酶基因AtTGG5编码区全长序列的克隆第34-37 页
　　　　　　· 引物的设计第34 页
　　　　　　· PCR扩增第34-35 页
　　　　　　· 目的片段的克隆及重组子的筛选与鉴定第35-37 页
　　　　　　　　· PCR产物的纯化第35 页
　　　　　　　　· PCR纯化产物与T载体的连接第35-36 页
　　　　　　　　· 大肠杆菌感受态的制备第36 页
　　　　　　　　· 转化大肠杆菌第36 页
　　　　　　　　· 质粒的提取第36-37 页
　　　　　　　　· 酶切鉴定和测序第37 页
　　　　· 拟南芥TGG5基因的RT-PCR分析第37-38 页
　　　　　　· 拟南芥各器官总RNA的提取第37-38 页
　　　　　　· cDNA的合成及TGG5的RT-PCR分析第38 页
　　· ATTGG5基因酵母表达载体构建及转化第38-41 页
　　　　· 表达载体的构建第38-40 页
　　　　　　· 芥子酶基因ATTGG5编码区的克隆第38-39 页
　　　　　　· ATTGG5基因的酶切第39 页
　　　　　　· AtTGG5基因与载体pPIC3.5K的连接第39-40 页
　　　　　　· 克隆和测序第40 页
　　　　· 毕赤酵母的转化第40-41 页
　　　　　　· 毕赤酵母感受态的制备第40 页
　　　　　　· 表达载体的线性化第40 页
　　　　　　· 转化第40-41 页
　　　　　　· 阳性克隆的筛选第41 页
　　· TGG5重组蛋白的大量表达及纯化第41-43 页
　　　　· 重组蛋白的大量表达第41 页
　　　　· 重组蛋白的纯化第41-42 页
　　　　· 重组蛋白的SDS-PAGE分析第42 页
　　　　· 酶活性分析第42-43 页
　　· TGG5重组蛋白的酶学特性研究第43-44 页
4 结果与分析第44-57 页
　　· 拟南芥芥子酶基因ATTGG5的克隆第44-46 页
　　　　· 拟南芥总RNA的提取第44 页
　　　　· AtTGG5全长编码区域的克隆第44-45 页
　　　　· 拟南芥AtTGG5基因的RT-PCR表达分析第45-46 页
　　· AtTGG5的生物信息学分析第46-50 页
　　　　· AtTGG5基因序列和氨基酸序列第46-47 页
　　　　· AtTGG5的蛋白特性分析第47-48 页
　　　　· AtTGG5的亚细胞定位第48 页
　　　　· AtTGG5的信号肽预测分析第48-49 页
　　　　· AtTGG5的疏水性和亲水性分析第49 页
　　　　· AtTGG5的跨膜区预测分析第49-50 页
　　· ATTGG5基因酵母表达载体的构建第50-51 页
　　· ATTGG5重组蛋白的表达和纯化第51-52 页
　　· ATTGG5重组蛋白的酶学特性分析第52-57 页
　　　　· 酶的动力学常数第52-53 页
　　　　· pH对酶活力的影响第53-54 页
　　　　· 抗坏血酸(Vc)对酶活力的影响第54 页
　　　　· NaCl浓度对酶活力的影响第54-55 页
　　　　· 温度对酶活力的影响第55-56 页
　　　　· 80℃高温条件下酶的稳定性第56-57 页
5 讨论第57-61 页
　　· 关于芥子酶的起源与进化第57-58 页
　　· 关于酵母的转化第58-59 页
　　· 关于芥子酶基因在酵母中的表达与纯化第59 页
　　· 关于酶学活性的分析第59-60 页
　　· 后续问题第60-61 页
6 结论第61-62 页
参考文献第62-67 页
缩略词第67-68 页
致谢第68页

本篇论文共68页，点击这进入下载页面。
 
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