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重组人DNase Ⅰ在大肠杆菌中的表达与分离纯化
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重组人DNase Ⅰ在大肠杆菌中的表达与分离纯化
论文目录
摘要
第1-6 页
ABSTRACT
第6-12 页
第一章 绪论
第12-28 页
· DNase Ⅰ简介
第12-17 页
· DNase Ⅰ的蛋白质化学与结构
第12-13 页
· DNase Ⅰ编码基因及表达
第13-15 页
· DNase Ⅰ的功能
第15 页
· DNase Ⅰ的临床应用
第15-17 页
· DNase Ⅰ的生产方法
第17-18 页
· 天然提取法
第17-18 页
· 基因工程方法
第18 页
· DNase Ⅰ前景展望
第18-19 页
· 大肠杆菌表达系统简介
第19-24 页
· 用大肠杆菌进行基因表达的一般策略
第19 页
· 影响基因重组蛋白质在大肠杆菌中表达的因素
第19-21 页
· 宿主的选择和培养条件的控制
第21 页
· 外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式
第21-24 页
· 重组蛋白下游纯化技术
第24-28 页
· 层析方法的选择
第24-25 页
· 离子交换层析
第25 页
· 凝胶过滤层析
第25-26 页
· 其他方法
第26-28 页
第二章 人DNase Ⅰ基因的克隆
第28-38 页
· 引言
第28 页
· 实验材料与仪器
第28-29 页
· 实验材料
第28 页
· 实验仪器
第28-29 页
· 实验方法
第29-34 页
· 引物设计及合成
第29-30 页
· PCR扩增
第30-31 页
· PCR产物回收(试剂盒)
第31 页
· 连接
第31-32 页
· 感受态细胞的制备(氯化钙法)
第32 页
· 转化
第32 页
· 质粒提取(碱裂解法)
第32-33 页
· 酶切鉴定
第33 页
· 基因测序鉴定
第33 页
· 表达载体pET-22b-hDNASE的构建
第33-34 页
· 结果分析与讨论
第34-37 页
· PCR产物琼脂糖凝胶电泳
第34 页
· 酶切鉴定
第34-35 页
· 测序鉴定
第35-36 页
· 表达载体pET-22b-hDNASE图谱
第36-37 页
· 本章小结
第37-38 页
第三章 重组人DNase Ⅰ基因工程菌培养条件的优化
第38-52 页
· 引言
第38 页
· 试验材料与仪器
第38-39 页
· 试验材料
第38-39 页
· 实验仪器
第39 页
· 实验方法
第39-40 页
· 菌种活化
第39 页
· 菌种培养
第39-40 页
· 不同菌种的选择
第40 页
· 发酵过程各因素的影响
第40-41 页
· 培养时间对基因工程菌生长的影响
第40 页
· 诱导条件的影响
第40-41 页
· 分析方法
第41 页
· 菌体浓度的测定
第41 页
· SDS-PAGE分析目的蛋白表达量
第41 页
· 结果与讨论
第41-50 页
· 不同菌种融合蛋白表达量分析
第41-43 页
· 基因工程菌的生长
第43 页
· 不同诱导条件对融合蛋白表达量的影响
第43-50 页
· 小结
第50-52 页
第四章 重组人DNase Ⅰ的分离与纯化
第52-62 页
· 引言
第52 页
· 实验材料和仪器
第52-53 页
· 实验材料
第52 页
· 实验仪器
第52-53 页
· 实验方法
第53-55 页
· 融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)内的分布
第53-54 页
· 两种诱导条件下重组蛋白的分离与纯化
第54-55 页
· LC-ESI-MS/MS鉴定rhDNase Ⅰ
第55 页
· 分析方法
第55-56 页
· SDS-PAGE凝胶电泳
第55 页
· 蛋白浓度的测定
第55 页
· DNase Ⅰ酶活测定
第55-56 页
· 结果与分析
第56-59 页
· 融合蛋白在菌体中的分布
第56-57 页
· 融合蛋白的分离纯化
第57-58 页
· LC-ESI-MS/MS鉴定rhDNase Ⅰ
第58-59 页
· 小结
第59-62 页
第五章 结论与建议
第62-64 页
· 结论
第62-63 页
· 建议
第63-64 页
参考文献
第64-68 页
附录
第68-72 页
致谢
第72-74 页
研究成果及发表的学术论文
第74-75 页
作者和导师简介
第75-76 页
北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书
第76-77页
本篇论文共
77
页,
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