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酿酒酵母转座标签插入突变体菌株263-H9中高盐胁迫应答基因的探寻

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分类:教育论文网→生物科学论文→分子生物学论文基因工程(遗传工程)论文
酿酒酵母转座标签插入突变体菌株263-H9中高盐胁迫应答基因的探寻
论文目录
 
目录第1-7 页
摘要第7-9 页
ABSTRACT第9-11 页
第一章 前言第11-30 页
  1 酿酒酵母渗透压胁迫第11-18 页
    1.1 酿酒酵母渗透压胁迫应答机理第11-18 页
      1.1.1 渗透压胁迫信号传导途径第12-16 页
        1.1.1.1 HOG信号传导途径第13-14 页
        1.1.1.2 PKC信号传导途径第14-16 页
      1.1.2 渗透压胁迫下的酵母应答过程第16-18 页
  2 钠离子胁迫应答分子机制第18-23 页
    2.1 Na~+胁迫应答功能蛋白第18-20 页
      2.1.1 Ena1p第19 页
      2.1.2 Nha1p第19 页
      2.1.3 Pma1p和Trk1/2p第19-20 页
      2.1.4 Nhx1p与Vmap第20 页
    2.2 Na~+胁迫信号传导途径第20-22 页
      2.2.1 钙调素信号途径第20-22 页
      2.2.2 PKA信号途径第22 页
      2.2.3 TOR信号途径第22 页
    2.3 盐胁迫下基因的瞬时应答与延迟应答机制第22-23 页
  3 转座标签的作用机理第23-28 页
    3.1 转座子及转座子标签第23-24 页
    3.2 转座子标签及应用第24-25 页
      3.2.1 Tn3成分和mTn3转座子标签第24-25 页
    3.3 转座子标签插入位点的鉴定第25-28 页
      3.3.1 拯救质粒(rescue plasmid)法第25-26 页
      3.3.2 基于PCR的分离方法第26-28 页
        3.3.2.1 锚定载体PCR(Vectorette PCR)第26-27 页
        3.3.2.2 TAIL-PCR与ST-PCR第27-28 页
  4 展望第28-29 页
  5 本论文的研究内容第29-30 页
第二章 本实验室的前期工作第30-35 页
  1.1 酿酒酵母插入突变体库的建立第30-31 页
  1.2 高盐胁迫酿酒酵母敏感型突变体的筛选第31 页
  1.3 转座标签插入点的确定第31-32 页
  1.4 转座标签数目进一步验证第32-33 页
    1.4.1 重复测序第32 页
    1.4.2 Southern杂交第32-33 页
    1.4.3 拯救质粒法第33 页
  1.5 插入突变体的分析第33-35 页
第三章 本论文的研究工作第35-63 页
  1 材料和方法第36-42 页
    1.1 菌株和质粒第36-37 页
    1.2 分子克隆用酶和试剂第37 页
    1.3 培养基第37-38 页
    1.4 微生物学技术第38-39 页
      1.4.1 菌体的生长第38 页
      1.4.2 菌种的保存第38 页
      1.4.3 梯度生长实验第38 页
      1.4.4 酿酒酵母二倍体细胞的制备第38-39 页
    1.5 分子生物学方法第39-42 页
      1.5.1 常规分子生物学方法第39 页
      1.5.2 酵母染色体的提取第39 页
      1.5.3 PCR反应第39-40 页
      1.5.4 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收第40 页
      1.5.5 限制性核酸内切酶酶切第40 页
      1.5.6 酿酒酵母完整细胞转化法第40-41 页
      1.5.7 酿酒酵母质粒的提取与扩增第41 页
      1.5.8 基因敲除(Gene knockout)第41-42 页
  2.结果与讨论第42-61 页
    2.1 GIP2基因缺失菌株的研究第42-44 页
      2.1.1 GIP2基因缺失菌株的构建第42-43 页
      2.1.2 GIP2基因缺失菌株的验证第43 页
      2.1.3 DW-102梯度生长实验第43-44 页
      2.1.4 讨论第44 页
    2.2 YER053C-A基因缺失菌株的研究第44-47 页
      2.2.1 YER053C-A基因缺失菌株的构建第44-45 页
      2.2.2 YER053C-A基因缺失菌株的验证第45-46 页
      2.2.3 DW-101梯度生长实验第46 页
      2.2.4 讨论第46-47 页
    2.3 转座标签插入位点的研究第47-50 页
      2.3.1 DW-100和DW-103菌株的构建第47-48 页
      2.3.2 DW-100和DW-103菌株的验证第48-50 页
      2.3.3 DW-100和DW-103菌株梯度生长实验第50 页
      2.3.4 讨论第50 页
    2.4 263-H9和DW-100杂交二倍体的研究第50-52 页
      2.4.1 263-H9和DW-100杂交二倍体的构建第50-51 页
      2.4.2 W2菌株的梯度生长实验第51-52 页
      2.4.3 讨论第52 页
    2.5 利用pHR81酿酒酵母染色体文库探寻263-H9突变位点的研究第52-53 页
      2.5.1 pHR81酿酒酵母染色体文库的应用第52 页
      2.5.2 H9-001菌株中质粒的反转实验第52-53 页
      2.5.3 P2-001菌株的构建与梯度生长实验第53 页
      2.5.4 讨论第53 页
    2.6 pHR81-001质粒中酿酒酵母染色体片段的研究第53-61 页
      2.6.1 pHR81-001质粒中酿酒酵母染色体片段的测序第53-54 页
      2.6.2 263-H9菌株中PBS2基因与TRK1片段的克隆第54 页
      2.6.3 263-H9菌株中PBS2基因与TRK1片段测序结果第54-58 页
        2.6.3.1 263-H9菌株中PBS2基因测序结果第54-57 页
        2.6.3.2 263-H9菌株中TRK1片段测序结果第57-58 页
      2.6.4 讨论第58-61 页
        2.6.4.1 测序结果分析第58 页
        2.6.4.2 Pbs2p的功能第58-60 页
        2.6.4.3 Trk1p的功能第60 页
        2.6.4.4 转座标签与PBS2突变位点的关系第60-61 页
  3 小结与展望第61-63 页
参考文献第63-68 页
致谢第68-69 页
学位论文评阅及答辩情况表第69 页

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