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大黄鱼IGF-Ⅰ基因的克隆及原核表达研究

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大黄鱼IGF-Ⅰ基因的克隆及原核表达研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-11页
第一章 文献综述第11-19页
  · 大黄鱼的概况第11-14页
    · 外部形态特征第12-13页
    · 自然栖息环境第13页
    · 摄食类型和食物组成第13页
    · 养殖环境第13-14页
  · 胰岛素样生长因子研究进展第14-19页
    · 胰岛素样生长因子(IGFs)及其系统介绍第14页
    · IGF-Ⅰ的结构第14-15页
    · 胰岛素样生长因子-Ⅰ的受体第15页
    · 胰岛素样生长因子-Ⅰ的结合蛋白第15-16页
    · 胰岛素样生长因子-Ⅰ的生理功能第16-17页
    · 胰岛素样生长因子-Ⅰ表达的调节第17-18页
    · 鱼类胰岛素样因子-Ⅰ的研究现状第18-19页
第二章 绪论第19-21页
  · 研究的目的及意义第19页
  · 研究范围与内容第19-21页
    · 研究内容第19-20页
    · 主要研究方法与路线第20-21页
第三章 大黄鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的克隆与序列分析第21-30页
  · 实验动物、载体和菌种第21页
    · 实验动物第21页
    · 载体与菌株第21页
  · 主要试剂及配制方法第21-22页
    · 主要分子生物学试剂第21页
    · 主要溶液及缓冲液第21-22页
  · 主要仪器与设备第22页
  · PCR 引物设计第22页
  · 大黄鱼肝胰脏总 RNA 的提取及质量检测第22-23页
    · 大黄鱼肝胰脏总 RNA 提取第22-23页
    · RNA 的检测第23页
  · 大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 全长的获得第23-30页
    · 反转录合成 cDNA 第一链第23-24页
    · 大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 中间片段扩增第24页
    · RACE 原理和程序第24-28页
    · 大肠杆菌 DH5α感受态的制备第28页
    · 目的片段与 T 载体的连接第28页
    · 质粒 DNA 转化大肠杆菌第28-29页
    · 蓝白斑菌落筛选重组质粒第29页
    · PCR 扩增鉴定含重组质粒的菌液第29页
    · 测序与分析第29-30页
第四章 大黄鱼 IGF-Ⅰ的原核表达第30-37页
  · 实验材料第30-31页
    · 载体和菌株第30页
    · 主要试剂及药品第30页
    · 主要溶液第30-31页
  · 质粒的提取第31-32页
  · 表达载体构建第32-37页
    · 插入片段的制备第32-33页
    · 构建 pMDT/ IGF-Ⅰ重组质粒第33页
    · 重组质粒 pMDT/ IGF-Ⅰ的提取及鉴定第33-34页
    · 双酶切并回收重组质粒与载体 pET28a第34页
    · 连接产物的转化及鉴定第34页
    · 重组菌的诱导表达第34-35页
    · 重组蛋白纯化第35页
    · SDSPAGE 分析产物第35-37页
第五章 结果与分析第37-45页
  · 大黄鱼肝脏总 RNA 的提取第37页
  · 大黄鱼肝胰脏总 cDNA 的扩增第37页
  · 大黄鱼胰岛素样生长因子I(IGF-Ⅰ)的克隆第37-43页
    · 大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 中间片段的扩增第37-38页
    · 大黄鱼 IGF-Ⅰ3'和 5'片段的获得第38-39页
    · 大黄鱼 IGF-Ⅰ基因的全长 cDNA 序列第39-40页
    · 大黄鱼 IGF-Ⅰ蛋白的多肽序列分析第40-43页
  · 大黄鱼 IGF-Ⅰ的原核表达及其产物纯化第43-45页
    · 质粒的提取第43页
    · 原核表达及产物纯化第43-45页
第六章 讨论第45-49页
  · 大黄鱼肝胰脏总 RNA 的提取第45页
  · PCR 扩增引物的设计第45-46页
  · RACE 的优点和局限性第46页
  · PCR 反应条件的优化第46-47页
  · 大黄鱼 IGF-Ⅰ蛋白的同源性分析第47页
  · 大黄鱼 IGF-Ⅰ在大肠杆菌中的表达第47-49页
    · 鱼类 IGF-Ⅰ的原核表达及其载体的选择第47-48页
    · 包涵体的提取与纯化第48-49页
第七章 结论第49-50页
参考文献第50-55页
致谢第55-56页
附录一第56-57页
附录二第57页

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