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梭菌氢酶基因hyd的同源克隆、原核表达以及敲除载体的构建
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梭菌氢酶基因hyd的同源克隆、原核表达以及敲除载体的构建
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-11页
第一章 绪论
第11-19页
· 氢酶的研究现状
第11-13页
· 氢酶的分类
第11页
· 氢酶的结构
第11-12页
· 氢酶基因的克隆与表达
第12-13页
· 产氢菌
第13-14页
· 产氢菌的分类
第13页
· 生物制氢的研究
第13-14页
· 梭菌氢酶的研究
第14-16页
· 铁还原菌研究进展
第16-17页
· 铁还原菌概述
第16页
· 异化铁还原的意义
第16页
· 异化铁还原机制研究进展
第16-17页
· 基因失活的研究方法
第17-18页
· 选题依据
第18-19页
· 背景简介
第18页
· 研究内容
第18-19页
第二章 菌株鉴定
第19-25页
· 实验材料
第19页
· 菌株与质粒
第19页
· 主要试剂
第19页
· 实验方法
第19-22页
· 基因组 DNA 提取
第19-20页
· 16S rDNA 的扩增
第20页
· 回收纯化
第20页
· 连接与转化
第20-21页
· 检测与测序
第21-22页
· 构建系统发育树
第22页
· 结果与分析
第22-24页
· 总 DNA 的提取
第22页
· 16S rDNA 的 PCR 扩增
第22页
· 菌落 PCR 检测
第22-23页
· 测序结果
第23-24页
· 小结
第24-25页
第三章 氢酶基因的同源克隆及序列分析
第25-30页
· 实验材料
第25页
· 菌株与质粒
第25页
· 主要试剂
第25页
· 实验方法
第25-26页
· 引物设计
第25页
· 氢酶基因(hyd)部分序列的同源克隆
第25-26页
· 序列分析
第26页
· 结果与分析
第26-28页
· hyd 基因部分序列扩增结果
第26页
· hyd 基因片段序列分析
第26-27页
· hyd 基因片段的系统发育分析
第27-28页
· hyd 基因片段的分子结构预测
第28页
· 讨论
第28-29页
· 小结
第29-30页
第四章 氢酶基因的原核表达
第30-40页
· 实验材料
第30页
· 菌株与质粒
第30页
· 工具酶与试剂
第30页
· 主要实验仪器
第30页
· 实验方法
第30-34页
· 原核表达载体的构建
第30-32页
· 目的基因在大肠杆菌中的表达
第32-34页
· 目的蛋白诱导表达条件的优化
第34页
· 可溶性表达分析
第34页
· 结果与分析
第34-38页
· 氢酶基因部分片段的扩增
第34-35页
· 重组表达质粒双酶切鉴定
第35-36页
· 重组表达片段的分子量预测图
第36页
· 目的蛋白表达检测
第36-37页
· 诱导条件优化
第37-38页
· 可溶性分析检测
第38页
· 讨论
第38-39页
· 小结
第39-40页
第五章 氢酶基因敲除载体的构建
第40-45页
· 实验材料
第40页
· 菌株与质粒
第40页
· 主要试剂
第40页
· 实验方法
第40-42页
· 5'端同源臂及抗性基因的扩增
第40-41页
· 敲除载体的构建
第41-42页
· 结果与分析
第42-43页
· 同源臂与抗性基因片段的扩增结果
第42页
· 敲除载体构建结果
第42-43页
· 讨论
第43页
· 小结
第43-45页
第六章 氢酶基因的相对定量检测
第45-54页
· 实验材料
第45页
· 菌液样品
第45页
· 所用试剂
第45页
· 所用仪器
第45页
· 实验方法
第45-48页
· 菌液样品培养
第45-46页
· 提取 RNA
第46-47页
· cDNA 的合成
第47页
· PCR
第47页
· 相对定量 PCR
第47页
· 结果表示
第47-48页
· 结果与分析
第48-51页
· RNA 的提取
第48页
· cDNA 的常规 PCR 检验
第48页
· 相对定量 PCR 结果
第48-49页
· 相对定量 PCR 数据分析
第49-51页
· 讨论
第51-53页
· 小结
第53-54页
第七章 结论与展望
第54-55页
· 结论
第54页
· 展望
第54-55页
参考文献
第55-59页
致谢
第59-60页
作者简介
第60页
本篇论文共
60
页,
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