论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 水稻白叶枯病 | 第14-15页 |
| 1.2 植物抗病机制 | 第15-19页 |
| 1.2.1 水杨酸介导的抗病途径 | 第15-16页 |
| 1.2.2 茉莉酸介导的抗病途径 | 第16-17页 |
| 1.2.3 赤霉素介导的抗病通路 | 第17页 |
| 1.2.4 乙烯介导的抗病途径 | 第17-18页 |
| 1.2.5 其它激素介导的抗病途径 | 第18-19页 |
| 1.3 WRKY转录因子的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 转录因子的结构、分类和功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子的结构与分类 | 第20页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子的功能 | 第20-23页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术研究进展 | 第23-26页 |
| 1.4.1 基因编辑技术简介 | 第23-24页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas系统简介 | 第24页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas9技术在水稻基因功能研究中的应用 | 第24-26页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9载体优化及应用其编辑水稻D3基因 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.1 材料与菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 载体与试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 大肠杆菌热激感受态细胞DH5α的制备 | 第29页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌电击感受态细胞EHA105的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 CRISPR/Cas9载体优化 | 第30-32页 |
| 2.2.4 靶位点的选择与引物设计 | 第32-33页 |
| 2.2.5 CRISPR/Cas9基因编辑载体构建 | 第33-35页 |
| 2.2.6 农杆菌的转化及其介导的水稻日本晴遗传转化 | 第35-36页 |
| 2.2.7 转基因水稻植株突变体检测 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9基因编辑载体构建 | 第37-38页 |
| 2.3.2 转基因植株突变体检测结果 | 第38-41页 |
| 2.3.3 转基因水稻突变体植株表型鉴定 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 OsWRKY28 CRISPR/Cas9材料的获取与初步分析 | 第46-50页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第47-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 基因克隆 | 第50-58页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第50页 |
| 4.1.1 材料与菌株 | 第50页 |
| 4.1.2 载体与试剂 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 4.2.1 水稻叶片总RNA提取 | 第50-51页 |
| 4.2.2 cDNA的合成 | 第51-52页 |
| 4.2.3 引物设计及目标基因OsWRKY28的CDS序列扩增 | 第52-53页 |
| 4.2.4 凝胶回收纯化 | 第53-54页 |
| 4.2.5 T-A连接及连接产物的转化 | 第54页 |
| 4.2.6 菌液鉴定及序列分析 | 第54页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第54-56页 |
| 4.3.1 OsWRKY28基因克隆 | 第54-55页 |
| 4.3.2 测序结果分析 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 OsWRKY28基因的表达分析 | 第58-72页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第58-59页 |
| 5.1.1 材料与菌株 | 第58页 |
| 5.1.2 载体与试剂 | 第58-59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59-64页 |
| 5.2.1 OsWRKY28的亚细胞定位分析 | 第59-62页 |
| 5.2.2 OsWRKY28的自激活转录活性分析 | 第62-63页 |
| 5.2.3 OsWRKY28的组织性表达 | 第63-64页 |
| 5.2.4 OsWRKY28对激素处理和环境胁迫的响应 | 第64页 |
| 5.2.5 OsWRKY28对白叶枯病菌生理小种P10(PXO124)的响应 | 第64页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第64-69页 |
| 5.3.1 OsWRKY28的亚细胞定位 | 第64-66页 |
| 5.3.2 OsWRKY28自激活转录活性分析 | 第66-67页 |
| 5.3.3 OsWRKY28的组织表达分析 | 第67页 |
| 5.3.4 OsWRKY28对激素处理和环境胁迫的响应 | 第67-68页 |
| 5.3.5 OsWRKY28对白叶枯病菌的响应 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-72页 |
| 第六章 OsWRKY28超表达材料的获取及初步分析 | 第72-84页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第72页 |
| 6.1.1 材料与菌株 | 第72页 |
| 6.1.2 载体与试剂 | 第72页 |
| 6.2 实验方法 | 第72-75页 |
| 6.2.1 OsWRKY28超表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 6.2.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第73-74页 |
| 6.2.3 转基因植株的阳性鉴定 | 第74页 |
| 6.2.4 转基因植株OsWRKY28表达量的检测 | 第74-75页 |
| 6.2.5 部分超表达植株中marker gene的表达量的检测 | 第75页 |
| 6.2.6 转基因植株抗病性分析 | 第75页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第75-81页 |
| 6.3.1 OsWRKY28超表达载体的构建 | 第75-76页 |
| 6.3.2 T_0代转基因植株的阳性鉴定及表达量检测 | 第76-77页 |
| 6.3.3 T_1代转基因植株的阳性鉴定及表达量检测 | 第77-79页 |
| 6.3.4 T_1代转基因阳性植株中marker gene的表达量 | 第79-80页 |
| 6.3.5 OsWRKY28 T_1代超表达材料抗病性分析 | 第80-81页 |
| 6.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第七章 总结 | 第84-88页 |
| 7.1 主要结论 | 第84-85页 |
| 7.2 展望 | 第85-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 附录 | 第100-106页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-112页 |
