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人源性抗bFGF单链抗体及双价抗体在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定

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人源性抗bFGF单链抗体及双价抗体在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-5页
目录第5-7页
第一部分 前言第7-14页
  · bFGF 与血管再生第7-8页
  · bFGF 与肺癌第8-9页
  · 小分子抗体及其在肿瘤诊治方面的应用第9-10页
  · 毕赤酵母表达系统及其在基因工程抗体中的应用第10-11页
  · 研究目的及意义第11-13页
  · 实验技术路线第13-14页
第二部分 材料与方法第14-34页
  · 实验材料第14-18页
    · 载体和菌株第14页
    · 主要试剂第14页
    · 主要试剂配制方法第14-17页
    · 主要仪器设备第17-18页
  · 实验方法第18-34页
    · 抗 bFGF ScFv 基因的扩增及克隆载体的构建第18-21页
    · 抗 bFGF Diabody 基因的构建及克隆载体的构建第21-24页
    · ScFv、Diabody 酵母表达载体的构建第24-25页
    · pPICZαA–ScFv/Diabody 转化毕赤酵母 GS115 及酵母工程菌的筛选第25-27页
    · ScFv、Diabody 酵母工程菌的诱导表达及鉴定第27-29页
    · ScFv、Diabody 酵母工程菌的摇瓶发酵及纯化第29-32页
    · CCK-8 法检测人肺腺癌细胞株 A549 细胞增殖抑制作用第32页
    · Hoechst 33258 染色观察人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡第32-33页
    · Annexin V-FITC/PI 检测 Diabody 诱导人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡第33-34页
第三部分 结果与分析第34-46页
  · 抗 bFGF ScFv 基因的克隆及表达载体构建第34-36页
  · 抗 bFGF Diabody 基因的克隆及表达载体构建第36-37页
  · pPICZαA–ScFv 转化毕赤酵母 GS115 及酵母工程菌的筛选第37-38页
    · pPICZαA–ScFv、pPICZαA-Diabody 线性化质粒的制备第37页
    · 高拷贝转化子筛选第37-38页
  · 重组酵母的表达及鉴定第38-39页
  · 最佳诱导表达时间的确定第39-40页
  · 表达产物的纯化第40-43页
    · 表达产物的纯化及 SDS-PAGE 鉴定第40-42页
    · 目的蛋白浓度测定第42页
    · 间接 ELISA 检测第42-43页
  · 肿瘤细胞增殖抑制试验第43-44页
  · Hoechst 33258 染色观察人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡第44-45页
  · Annexin V-FITC/PI 检测 Diabody 诱导人肺腺癌细胞株 A549 的凋亡第45-46页
第四部分 讨论第46-48页
总结第48-49页
参考文献第49-55页
中英文略语表第55-57页
附录第57-58页
  1 在校期间发表论文及申请专利情况第57页
  2 在校期间参加的学术活动第57-58页
致谢第58页

本篇论文共58页,点击这进入下载页面
 
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