论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4
页 |
| Abstract | 第4-8
页 |
| 第1章 引言 | 第8-18
页 |
| · 肌钙蛋白的特征结构 | 第8-13
页 |
| · 肌钙蛋白I (TnI) | 第8-11
页 |
| · 肌钙蛋白T（TnT） | 第11-12
页 |
| · 肌钙蛋白C（TnC） | 第12-13
页 |
| · 肌钙蛋白的功能及应用 | 第13-17
页 |
| · Tn 在肌肉收缩的作用 | 第13
页 |
| · fsTnI 新功能的研究 | 第13
页 |
| · 选题背景及意义 | 第13-17
页 |
| · 研究内容的概述 | 第17-18
页 |
| 第2章 CTNI 和CTNT 的原核表达及纯化 | 第18-44
页 |
| · 实验材料 | 第18-19
页 |
| · cDNA、菌株及质粒 | 第18
页 |
| · 主要试剂 | 第18-19
页 |
| · 实验用具 | 第19
页 |
| · 主要仪器设备 | 第19
页 |
| · 试剂配制 | 第19-24
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第19-20
页 |
| · SDS-PAGE 和Western Blot 试剂 | 第20-22
页 |
| · 细菌培养基 | 第22-23
页 |
| · 纯化缓冲液 | 第23-24
页 |
| · 实验方法 | 第24-36
页 |
| · 研究策略 | 第24-25
页 |
| · 引物设计 | 第25
页 |
| · 引物稀释 | 第25
页 |
| · cTnI 和cTnT 编码序列的PCR 扩增 | 第25-26
页 |
| · PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27
页 |
| · PCR 产物的胶回收 | 第27-28
页 |
| · pET-32a 载体的扩增及小量提取 | 第28-29
页 |
| · 质粒和PCR 产物双酶切 | 第29-30
页 |
| · 质粒和PCR 产物酶切片断的胶回收 | 第30
页 |
| · 酶切后的PCR 产物片断与pET-32a 载体连接 | 第30-31
页 |
| · 连接产物转化DH5a 感受态 | 第31
页 |
| · pET-32a-cTnI/cTnT 重组质粒的小量提取 | 第31
页 |
| · pET-32a-cTnI 和pET-32a-cTnT 重组质粒的鉴定 | 第31-32
页 |
| · 重组的人cTnI/cTnT 蛋白的诱导表达 | 第32-33
页 |
| · cTnI/cTnT 蛋白 SDS-PAGE 及western 鉴定 | 第33-35
页 |
| · 纯化 | 第35-36
页 |
| · 实验结果 | 第36-41
页 |
| · PCR 扩增产物 | 第36
页 |
| · 重组pET-32a-cTnI 和pET32a-cTnT 双酶切图 | 第36-37
页 |
| · 重组质粒pET-32a-cTnI 和pET32a-cTnT 的测序结果 | 第37
页 |
| · 重组质粒pET-32a-cTnI 和pET-32a-cTnT 在 BL21 的表达 | 第37-39
页 |
| · 蛋白纯化 | 第39-41
页 |
| · 讨论 | 第41-43
页 |
| · 质粒pET-32a 的选择优点 | 第41
页 |
| · 优化诱导条件提高表达量 | 第41-42
页 |
| · 融合蛋白上清样品的纯化 | 第42-43
页 |
| · 展望 | 第43-44
页 |
| 第3章 真核稳定表达 CTNI | 第44-61
页 |
| · 实验材料 | 第44-45
页 |
| · 细胞株和质粒 | 第44
页 |
| · 主要试剂 | 第44
页 |
| · 实验用具 | 第44-45
页 |
| · 仪器设备 | 第45
页 |
| · 试剂配制 | 第45-46
页 |
| · 细胞转染及筛选试剂 | 第45-46
页 |
| · 实验方法 | 第46-53
页 |
| · 真核重组质粒的构建 | 第46-47
页 |
| · 细胞的复苏及换液 | 第47-48
页 |
| · 细胞的传代培养及冻存 | 第48
页 |
| · Fugen HD 转染试剂浓度梯度及时间梯度和转染效率 | 第48-49
页 |
| · 在哺乳动物细胞中进行瞬时表达 | 第49
页 |
| · 在哺乳动物细胞中进行稳定表达 | 第49-50
页 |
| · 稳定表达细胞株的基因组检测 | 第50-52
页 |
| · 稳定表达细胞株的RT-PCR 检测 | 第52-53
页 |
| · 表达细胞株的western 检测 | 第53
页 |
| · 实验结果 | 第53-57
页 |
| · 在COS-7 细胞中瞬时表达 | 第53-54
页 |
| · 在CHO 细胞中稳定表达 | 第54-57
页 |
| · 讨论 | 第57-60
页 |
| · 展望 | 第60-61
页 |
| 参考文献 | 第61-66
页 |
| 致谢 | 第66-67
页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第67页 |
