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生物可降解型载基因纳米粒的研究

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生物可降解型载基因纳米粒的研究
论文目录
 
中文摘要第18-22 页
英文摘要第22-27 页
符号说明第27-28 页
绪论第28-39 页
  1.引言第28-30 页
  2.基因载体研究概况第30-33 页
  3.本课题的设想和思路第33-39 页
第一部分 PicoGreen荧光分光光度法测定载基因纳米粒的包封率第39-49 页
  一、实验材料第39-40 页
    1 试剂与药品第39-40 页
    2 主要仪器第40 页
  二、实验方法第40-42 页
    1 质粒DNA的性质评价第40 页
      · 质粒DNA的酶切鉴定第40 页
      · 质粒DNA的含量和纯度分析第40 页
    2 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备第40-41 页
    3 DNA含量测定方法的建立第41-42 页
      · PicoGreen工作液配制第41 页
      · 激发、发射波长的选择第41 页
      · 标准曲线的建立第41 页
      · 放置时间的影响第41 页
      · 放置温度的影响第41-42 页
      · 干扰物质的影响第42 页
      · 精密度试验第42 页
      · 回收率试验第42 页
    4 载基因纳米粒包封率的测定第42 页
  三、实验结果第42-48 页
    1 酶切鉴定第42-43 页
    2 产量和纯度分析第43-44 页
    3 DNA含量测定方法的考查结果第44-47 页
      · 激发、发射波长的确定第44 页
      · 标准曲线的建立第44 页
      · 放置时间的影响第44-45 页
      · 放置温度的影响第45 页
      · 干扰物质的影响第45-46 页
      · 精密度试验第46-47 页
      · 回收率试验第47 页
    4 纳米粒的包封率第47-48 页
  四、讨论第48-49 页
第二部分 阴离子包封型载基因PLGA纳米粒的研究第49-64 页
  一、实验材料第50-51 页
    1 试剂与药品第50 页
    2 主要仪器第50-51 页
  二、实验方法第51-54 页
    1 载基因PLGA纳米粒的制备第51 页
      · 改良的纳米粒沉淀法第51 页
      · 复乳化溶剂挥发法第51 页
    2 载基因纳米粒的包封率的测定第51-52 页
    3 载基因PLGA纳米粒的形态、平均粒径和zeta电位第52 页
    4 载基因PLGA纳米粒中的DNA结构完整性分析第52 页
      · 琼脂糖凝胶的制备及使用方法第52 页
      · DNA结构完整性分析第52 页
    5 载基因PLGA纳米粒的抗核酸酶解能力考察第52-53 页
    6 载基因PLGA纳米粒的体外释放研究第53 页
    7 载基因PLGA纳米粒的细胞毒性试验第53-54 页
    8 统计学分析第54 页
    9 体外细胞转染试验第54 页
  三、实验结果第54-60 页
    1 载基因纳米粒的理化性质结果第54-56 页
    2 包封于纳米粒中DNA的结构完整性第56-57 页
    3 抗核酸酶解能力第57-58 页
    4 体外释放试验第58-59 页
    5 PLGA纳米粒的细胞毒性评价第59-60 页
    6 纳米粒的体外转染试验第60 页
  四、讨论第60-64 页
第三部分 阳离子载基因PLGA纳米粒的研究第64-81 页
  一、实验材料第65-66 页
    1 试剂与药品第65 页
    2 主要仪器第65-66 页
  二、实验方法第66-69 页
    1 空白阳离子PLGA纳米粒的制备第66 页
    2 CTAB-NPs的形态、粒径和表面电位的测定第66 页
    3 纳米粒最优处方的筛选第66-67 页
      · 单因素考察及预试验第66 页
      · 正交设计实验第66 页
      · 重现性考察第66-67 页
    4 阳离子载基因PLGA纳米粒的制备、最优比的考察第67 页
      · 阳离子载基因PLGA纳米粒的制备第67 页
      · DNA结合率的测定第67 页
      · CTAB-NPs与DNA最优比的考察第67 页
      · CTAB-NPs与DNA孵育时间的影响第67 页
    5 DNA-CTAB-NPs形态、粒径和表面电位的测定第67 页
    6 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验第67 页
    7 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶能力考察第67-68 页
      · DNA-CTAB-NPs中DNA提取方法的选择第67-68 页
      · 孵育时间的影响第68 页
      · 核酸酶浓度的影响第68 页
    8 DNA-CTAB-NPs的体外释放试验第68-69 页
    9 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性试验第69 页
    10 DNA-CTAB-NPs体外转染试验第69 页
  三、实验结果第69-79 页
    1 CTAB-NPs与DNA-CTAB-NPs的形态、粒径、表面电位第69-70 页
    2 CTAB-NPs处方考察结果第70-72 页
      · 单因素考察结果第70-71 页
      · 正交设计结果第71-72 页
      · 重现性考察结果第72 页
    3 CTAB-NPs与DNA结合最优比考察第72-73 页
      · NPs/DNA对DNA结合率的影响第72-73 页
      · 孵育时间对DNA结合率的影响第73 页
    4 琼脂糖凝胶电泳阻滞分析第73-74 页
    5 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶解能力考察第74-77 页
      · DNA提取方法选择结果第74-75 页
      · 酶解反应孵育时间的影响第75-76 页
      · 不同核酸酶浓度的影响第76-77 页
    6 体外释放结果第77 页
    7 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性评价结果第77-78 页
    8 DNA-CTAB-NPs的体外转染试验结果第78-79 页
  四、讨论第79-81 页
第四部分 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的研究第81-103 页
  一、实验材料第81-82 页
    1 试剂与药品第81-82 页
    2 主要仪器第82 页
  二、实验方法第82-87 页
    1 阳离子PLA-PEG纳米粒的制备与处方优化第82 页
    2 PLA-PEG-NPs最优处方的筛选第82-84 页
      · 单因素考察第82-83 页
      · 正交设计第83-84 页
      · 重现性考察第84 页
    3 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备与优化第84 页
      · 载基因纳米粒的制备第84 页
      · DNA结合率的测定第84 页
      · PLA-PEG-NPs与DNA最优比的考察第84 页
    4 纳米粒的形态、粒径和表面电位的测定第84 页
    5 DNA-PLA-PEG-NPs抗核酸酶能力考察第84-85 页
    6 DNA-PLA-PEG-NPs血浆稳定性考察第85 页
    7 DNA-PLA-PEG-NPs的体外释放试验第85-86 页
      · 质粒DNA在释放介质中的稳定性研究第85 页
      · 纳米粒体外释放试验第85-86 页
    8 释放DNA样本的结构和功能完整性第86 页
      · 结构完整性考察第86 页
      · 生物活性考察第86 页
    9 DNA-PLA-PEG-NPs的细胞毒性试验第86 页
    10 统计学分析第86-87 页
    11 DNA-PLA-PEG-NPs体外转染试验第87 页
  三、实验结果第87-100 页
    1 单因素考察结果第87-90 页
      · PLA-PEG浓度对纳米粒粒径的影响第87-88 页
      · CTAB和吐温80浓度对纳米粒粒径的影响第88-89 页
      · 丙酮体积对纳米粒粒径的影响第89 页
      · 磁力搅拌速度对纳米粒粒径的影响第89-90 页
      · 滴加速度对纳米粒粒径的影响第90 页
    2 正交设计结果第90-91 页
    3 处方重现性考察结果第91-92 页
    4 PLA-PEG-NPs与DNA的结合率评价结果第92-93 页
    5 纳米粒的理化性质评价第93-94 页
    6 纳米粒抗核酸酶解能力考察第94-95 页
    7 纳米粒的血浆稳定性考察第95-96 页
    8 纳米粒的体外释放试验第96-97 页
      · 质粒DNA在释放介质中的稳定性研究第96-97 页
      · 纳米粒体外释放结果第97 页
    9 释放DNA样本的完整性考察第97-98 页
      · 结构完整性考察第97-98 页
      · 功能完整性考察第98 页
    10 纳米粒的细胞毒性评价结果第98-99 页
    11 纳米粒的体外转染试验结果第99-100 页
  四、讨论第100-103 页
第五部分 阴离子生物粘附型载基因PLGA纳米粒的研究第103-119 页
  一、实验材料第104-105 页
    1 试剂与药品第104 页
    2 主要仪器第104-105 页
  二、实验方法第105-108 页
    1 乳化剂溶液的制备第105 页
    2 空白纳米粒的制备第105 页
    3 纳米粒物理形态,平均粒径和zeta电位第105-106 页
    4 载基因纳米粒的制备第106 页
    5 DNA凝胶阻滞试验第106 页
    6 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价第106 页
    7 纳米粒的体外释放试验第106 页
    8 纳米粒的抗DNase Ⅰ能力第106-107 页
    9 释放DNA的结构完整性考察第107 页
    10 细胞毒性考察第107-108 页
    11 统计学分析第108 页
    12 体外细胞转染试验第108 页
  三、实验结果第108-116 页
    1 PLGA纳米粒的理化性质第108-110 页
    2 凝胶阻滞分析第110 页
    3 生物粘附型纳米粒的DNA吸附率第110-111 页
    4 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价第111-112 页
    5 体外释放试验第112 页
    6 抗核酸酶解能力第112-114 页
    7 从纳米粒中释放的质粒DNA的结构完整性考察第114-115 页
    8 细胞毒性评价第115 页
    9 体外细胞转染试验第115-116 页
  四、讨论第116-119 页
总结与展望第119-124 页
  一、结论第119-121 页
  二、创新与发现第121-122 页
  三、展望第122-124 页
参考文献第124-134 页
致谢第134-135 页
攻读学位期间发表的学术论文目录第135-136 页
文献综述 聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒作为非病毒基因载体第136-143 页
学位论文评阅及答辩情况表第143 页

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