论文目录 | |
中文摘要 | 第18-22
页 |
英文摘要 | 第22-27
页 |
符号说明 | 第27-28
页 |
绪论 | 第28-39
页 |
1.引言 | 第28-30
页 |
2.基因载体研究概况 | 第30-33
页 |
3.本课题的设想和思路 | 第33-39
页 |
第一部分 PicoGreen荧光分光光度法测定载基因纳米粒的包封率 | 第39-49
页 |
一、实验材料 | 第39-40
页 |
1 试剂与药品 | 第39-40
页 |
2 主要仪器 | 第40
页 |
二、实验方法 | 第40-42
页 |
1 质粒DNA的性质评价 | 第40
页 |
· 质粒DNA的酶切鉴定 | 第40
页 |
· 质粒DNA的含量和纯度分析 | 第40
页 |
2 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备 | 第40-41
页 |
3 DNA含量测定方法的建立 | 第41-42
页 |
· PicoGreen工作液配制 | 第41
页 |
· 激发、发射波长的选择 | 第41
页 |
· 标准曲线的建立 | 第41
页 |
· 放置时间的影响 | 第41
页 |
· 放置温度的影响 | 第41-42
页 |
· 干扰物质的影响 | 第42
页 |
· 精密度试验 | 第42
页 |
· 回收率试验 | 第42
页 |
4 载基因纳米粒包封率的测定 | 第42
页 |
三、实验结果 | 第42-48
页 |
1 酶切鉴定 | 第42-43
页 |
2 产量和纯度分析 | 第43-44
页 |
3 DNA含量测定方法的考查结果 | 第44-47
页 |
· 激发、发射波长的确定 | 第44
页 |
· 标准曲线的建立 | 第44
页 |
· 放置时间的影响 | 第44-45
页 |
· 放置温度的影响 | 第45
页 |
· 干扰物质的影响 | 第45-46
页 |
· 精密度试验 | 第46-47
页 |
· 回收率试验 | 第47
页 |
4 纳米粒的包封率 | 第47-48
页 |
四、讨论 | 第48-49
页 |
第二部分 阴离子包封型载基因PLGA纳米粒的研究 | 第49-64
页 |
一、实验材料 | 第50-51
页 |
1 试剂与药品 | 第50
页 |
2 主要仪器 | 第50-51
页 |
二、实验方法 | 第51-54
页 |
1 载基因PLGA纳米粒的制备 | 第51
页 |
· 改良的纳米粒沉淀法 | 第51
页 |
· 复乳化溶剂挥发法 | 第51
页 |
2 载基因纳米粒的包封率的测定 | 第51-52
页 |
3 载基因PLGA纳米粒的形态、平均粒径和zeta电位 | 第52
页 |
4 载基因PLGA纳米粒中的DNA结构完整性分析 | 第52
页 |
· 琼脂糖凝胶的制备及使用方法 | 第52
页 |
· DNA结构完整性分析 | 第52
页 |
5 载基因PLGA纳米粒的抗核酸酶解能力考察 | 第52-53
页 |
6 载基因PLGA纳米粒的体外释放研究 | 第53
页 |
7 载基因PLGA纳米粒的细胞毒性试验 | 第53-54
页 |
8 统计学分析 | 第54
页 |
9 体外细胞转染试验 | 第54
页 |
三、实验结果 | 第54-60
页 |
1 载基因纳米粒的理化性质结果 | 第54-56
页 |
2 包封于纳米粒中DNA的结构完整性 | 第56-57
页 |
3 抗核酸酶解能力 | 第57-58
页 |
4 体外释放试验 | 第58-59
页 |
5 PLGA纳米粒的细胞毒性评价 | 第59-60
页 |
6 纳米粒的体外转染试验 | 第60
页 |
四、讨论 | 第60-64
页 |
第三部分 阳离子载基因PLGA纳米粒的研究 | 第64-81
页 |
一、实验材料 | 第65-66
页 |
1 试剂与药品 | 第65
页 |
2 主要仪器 | 第65-66
页 |
二、实验方法 | 第66-69
页 |
1 空白阳离子PLGA纳米粒的制备 | 第66
页 |
2 CTAB-NPs的形态、粒径和表面电位的测定 | 第66
页 |
3 纳米粒最优处方的筛选 | 第66-67
页 |
· 单因素考察及预试验 | 第66
页 |
· 正交设计实验 | 第66
页 |
· 重现性考察 | 第66-67
页 |
4 阳离子载基因PLGA纳米粒的制备、最优比的考察 | 第67
页 |
· 阳离子载基因PLGA纳米粒的制备 | 第67
页 |
· DNA结合率的测定 | 第67
页 |
· CTAB-NPs与DNA最优比的考察 | 第67
页 |
· CTAB-NPs与DNA孵育时间的影响 | 第67
页 |
5 DNA-CTAB-NPs形态、粒径和表面电位的测定 | 第67
页 |
6 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第67
页 |
7 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶能力考察 | 第67-68
页 |
· DNA-CTAB-NPs中DNA提取方法的选择 | 第67-68
页 |
· 孵育时间的影响 | 第68
页 |
· 核酸酶浓度的影响 | 第68
页 |
8 DNA-CTAB-NPs的体外释放试验 | 第68-69
页 |
9 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性试验 | 第69
页 |
10 DNA-CTAB-NPs体外转染试验 | 第69
页 |
三、实验结果 | 第69-79
页 |
1 CTAB-NPs与DNA-CTAB-NPs的形态、粒径、表面电位 | 第69-70
页 |
2 CTAB-NPs处方考察结果 | 第70-72
页 |
· 单因素考察结果 | 第70-71
页 |
· 正交设计结果 | 第71-72
页 |
· 重现性考察结果 | 第72
页 |
3 CTAB-NPs与DNA结合最优比考察 | 第72-73
页 |
· NPs/DNA对DNA结合率的影响 | 第72-73
页 |
· 孵育时间对DNA结合率的影响 | 第73
页 |
4 琼脂糖凝胶电泳阻滞分析 | 第73-74
页 |
5 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶解能力考察 | 第74-77
页 |
· DNA提取方法选择结果 | 第74-75
页 |
· 酶解反应孵育时间的影响 | 第75-76
页 |
· 不同核酸酶浓度的影响 | 第76-77
页 |
6 体外释放结果 | 第77
页 |
7 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性评价结果 | 第77-78
页 |
8 DNA-CTAB-NPs的体外转染试验结果 | 第78-79
页 |
四、讨论 | 第79-81
页 |
第四部分 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的研究 | 第81-103
页 |
一、实验材料 | 第81-82
页 |
1 试剂与药品 | 第81-82
页 |
2 主要仪器 | 第82
页 |
二、实验方法 | 第82-87
页 |
1 阳离子PLA-PEG纳米粒的制备与处方优化 | 第82
页 |
2 PLA-PEG-NPs最优处方的筛选 | 第82-84
页 |
· 单因素考察 | 第82-83
页 |
· 正交设计 | 第83-84
页 |
· 重现性考察 | 第84
页 |
3 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备与优化 | 第84
页 |
· 载基因纳米粒的制备 | 第84
页 |
· DNA结合率的测定 | 第84
页 |
· PLA-PEG-NPs与DNA最优比的考察 | 第84
页 |
4 纳米粒的形态、粒径和表面电位的测定 | 第84
页 |
5 DNA-PLA-PEG-NPs抗核酸酶能力考察 | 第84-85
页 |
6 DNA-PLA-PEG-NPs血浆稳定性考察 | 第85
页 |
7 DNA-PLA-PEG-NPs的体外释放试验 | 第85-86
页 |
· 质粒DNA在释放介质中的稳定性研究 | 第85
页 |
· 纳米粒体外释放试验 | 第85-86
页 |
8 释放DNA样本的结构和功能完整性 | 第86
页 |
· 结构完整性考察 | 第86
页 |
· 生物活性考察 | 第86
页 |
9 DNA-PLA-PEG-NPs的细胞毒性试验 | 第86
页 |
10 统计学分析 | 第86-87
页 |
11 DNA-PLA-PEG-NPs体外转染试验 | 第87
页 |
三、实验结果 | 第87-100
页 |
1 单因素考察结果 | 第87-90
页 |
· PLA-PEG浓度对纳米粒粒径的影响 | 第87-88
页 |
· CTAB和吐温80浓度对纳米粒粒径的影响 | 第88-89
页 |
· 丙酮体积对纳米粒粒径的影响 | 第89
页 |
· 磁力搅拌速度对纳米粒粒径的影响 | 第89-90
页 |
· 滴加速度对纳米粒粒径的影响 | 第90
页 |
2 正交设计结果 | 第90-91
页 |
3 处方重现性考察结果 | 第91-92
页 |
4 PLA-PEG-NPs与DNA的结合率评价结果 | 第92-93
页 |
5 纳米粒的理化性质评价 | 第93-94
页 |
6 纳米粒抗核酸酶解能力考察 | 第94-95
页 |
7 纳米粒的血浆稳定性考察 | 第95-96
页 |
8 纳米粒的体外释放试验 | 第96-97
页 |
· 质粒DNA在释放介质中的稳定性研究 | 第96-97
页 |
· 纳米粒体外释放结果 | 第97
页 |
9 释放DNA样本的完整性考察 | 第97-98
页 |
· 结构完整性考察 | 第97-98
页 |
· 功能完整性考察 | 第98
页 |
10 纳米粒的细胞毒性评价结果 | 第98-99
页 |
11 纳米粒的体外转染试验结果 | 第99-100
页 |
四、讨论 | 第100-103
页 |
第五部分 阴离子生物粘附型载基因PLGA纳米粒的研究 | 第103-119
页 |
一、实验材料 | 第104-105
页 |
1 试剂与药品 | 第104
页 |
2 主要仪器 | 第104-105
页 |
二、实验方法 | 第105-108
页 |
1 乳化剂溶液的制备 | 第105
页 |
2 空白纳米粒的制备 | 第105
页 |
3 纳米粒物理形态,平均粒径和zeta电位 | 第105-106
页 |
4 载基因纳米粒的制备 | 第106
页 |
5 DNA凝胶阻滞试验 | 第106
页 |
6 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价 | 第106
页 |
7 纳米粒的体外释放试验 | 第106
页 |
8 纳米粒的抗DNase Ⅰ能力 | 第106-107
页 |
9 释放DNA的结构完整性考察 | 第107
页 |
10 细胞毒性考察 | 第107-108
页 |
11 统计学分析 | 第108
页 |
12 体外细胞转染试验 | 第108
页 |
三、实验结果 | 第108-116
页 |
1 PLGA纳米粒的理化性质 | 第108-110
页 |
2 凝胶阻滞分析 | 第110
页 |
3 生物粘附型纳米粒的DNA吸附率 | 第110-111
页 |
4 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价 | 第111-112
页 |
5 体外释放试验 | 第112
页 |
6 抗核酸酶解能力 | 第112-114
页 |
7 从纳米粒中释放的质粒DNA的结构完整性考察 | 第114-115
页 |
8 细胞毒性评价 | 第115
页 |
9 体外细胞转染试验 | 第115-116
页 |
四、讨论 | 第116-119
页 |
总结与展望 | 第119-124
页 |
一、结论 | 第119-121
页 |
二、创新与发现 | 第121-122
页 |
三、展望 | 第122-124
页 |
参考文献 | 第124-134
页 |
致谢 | 第134-135
页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第135-136
页 |
文献综述 聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒作为非病毒基因载体 | 第136-143
页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第143
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