论文目录 | |
文献综述 | 第13-33
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第一章 猪瘟研究进展 | 第13-22
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· 概述 | 第13
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· 猪瘟的地理分布和危害 | 第13-14
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· 当前猪瘟流行新动态 | 第14-15
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· 猪瘟诊断的研究进展 | 第15-18
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· 动物实验 | 第15
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· 病毒分离 | 第15
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· 免疫学诊断研究进展 | 第15-17
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· 分子生物学诊断技术 | 第17-18
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· 猪瘟防制的研究进展 | 第18-19
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· 猪瘟疫苗的研究进展 | 第19-22
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· 传统疫苗 | 第19
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· 新型疫苗 | 第19-21
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· 新型疫苗的前景及存在的问题 | 第21-22
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第二章 猪瘟病毒及其研究进展 | 第22-33
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· 猪瘟病毒的生物学特性及其研究进展 | 第22-26
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· 病毒粒子结构 | 第22
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· CSFV的理化特性 | 第22-23
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· CSFV的培养特性 | 第23-24
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· CSFV的抗原性、毒力和分型 | 第24-25
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· 猪瘟病毒的进化和遗传分型 | 第25-26
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· 病毒的致病机制研究进展 | 第26-28
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· CSFV感染对外周血细胞亚群的影响 | 第26
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· CSFV诱导的白细胞减少的机制 | 第26-27
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· CSFV感染的靶细胞 | 第27
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· 单核细胞在CSFV感染中的作用 | 第27-28
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· 病毒的分子生物学研究进展 | 第28-33
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· CSFV基因组结构 | 第28-29
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· CSFV的编码蛋白及其功能 | 第29-33
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试验研究 | 第33-69
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第三章 猪瘟分子流行病学调查 | 第33-43
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· 材料与方法 | 第33-38
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· 疑似猪瘟病料 | 第33
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· 引物的设计与合成 | 第33
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· 主要试剂 | 第33-34
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· 主要仪器 | 第34
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· RNA提取 | 第34
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· RT-PCR和nPCR | 第34-35
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· 琼脂糖凝胶电泳 | 第35
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· 纯化回收DNA片段 | 第35
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· 纯化产物与pGEM-T Easy Vector连接 | 第35-36
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· 新鲜感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第36
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· 连接产物的转化 | 第36-37
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· 重组质粒的提取 | 第37
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· 重组质粒的鉴定 | 第37-38
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· 核酸序列分析和同源性比较 | 第38
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· 结果 | 第38-40
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· RT-PCR及nPCR | 第38
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· 重组质粒的鉴定 | 第38
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· 目的基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性比较 | 第38
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· CSFV系统发生树的构建 | 第38-40
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· 讨论 | 第40-42
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· 小结 | 第42-43
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第四章 猪瘟病毒E2基因主要抗原区在大肠杆菌中的表达 | 第43-53
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· 材料和方法 | 第43-48
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· 毒株 | 第43
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· 菌株和质粒 | 第43
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· 酶和试剂 | 第43-44
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· 仪器与设备 | 第44
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· 引物的设计与合成 | 第44
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· 病毒RNA的提取 | 第44
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· E2基因主要抗原区的获取 | 第44
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· 重组表达载体的构建 | 第44-45
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· 重组质粒的诱导表达 | 第45-1945
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· 表达产物的检测 | 第1945-48
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· 结果 | 第48-50
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· E2基因主要抗原区的获取 | 第48
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· 重组表达载体的鉴定 | 第48
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· E2蛋白主要抗原区在大肠杆菌中的诱导表达 | 第48
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· 表达产物的检测 | 第48-50
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· 讨论 | 第50-52
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· 小结 | 第52-53
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第五章 猪瘟病毒E2重组蛋白的变性、复性的研究 | 第53-60
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· 材料与方法 | 第53-55
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· 试剂 | 第53
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· 主要仪器 | 第53
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· 提取包涵体相关溶液的配制 | 第53-54
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· 对表达蛋白基因的抗原优势表位分析 | 第54
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· 重组E2工程菌的制备 | 第54
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· 包涵体的制备与蛋白质的变性溶解 | 第54
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· E2蛋白的复性 | 第54
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· E2复性蛋白浓度、纯度的测定 | 第54-55
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· 复性蛋白的反应活性测定 | 第55
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· 结果 | 第55-57
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· C株、LT株糖蛋白的抗原表位优势图 | 第55
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· 包涵体的分离 | 第55-56
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· 包涵体的变性 | 第56
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· 包涵体的复性 | 第56
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· E2复性蛋白浓度、纯度的测定 | 第56
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· 复性蛋白的免疫活性测定 | 第56-57
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· 讨论 | 第57-59
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· 小结 | 第59-60
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第六章 以重组E2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究 | 第60-69
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· 材料和方法 | 第60-62
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· 抗原 | 第60
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· 试剂及其耗材 | 第60
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· 所用溶液的配制 | 第60-61
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· ELISA方法的建立 | 第61
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· 特异性试验 | 第61-62
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· 重复性试验 | 第62
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· 敏感性试验 | 第62
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· 与用猪瘟全病毒建立的ELISA试剂盒、间接血凝试剂盒进行比较 | 第62
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· 临床血清样品的检测 | 第62
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· 稳定性试验 | 第62
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· 结果 | 第62-67
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· ELISA最佳工作条件的确定 | 第62-64
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· 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第64-65
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· ELISA特异性试验 | 第65
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· 重复性试验 | 第65
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· 敏感性试验 | 第65-66
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· 与用猪瘟全病毒建立的ELISA、间接血凝试剂盒的比较试验 | 第66-67
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· 临床血清样品的检测 | 第67
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· 稳定性试验 | 第67
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· 讨论 | 第67-68
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· 小结 | 第68-69
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结 论 | 第69-70
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参考文献 | 第70-77
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致 谢 | 第77-78
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作 者 简 介 | 第78
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