论文目录 | |
摘要 | 第1-6
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ABSTRACT | 第6-12
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第一章 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学及核蛋白研究进展 | 第12-24
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· IBV 分类地位及形态特征 | 第12-13
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· IBV 基因组 | 第13-16
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· S 基因 | 第14
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· M 基因 | 第14-15
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· 非结构域 | 第15-16
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· N 基因研究进展 | 第16-23
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· N 基因遗传变异研究 | 第16-17
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· N 蛋白的结构特征 | 第17-18
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· N 蛋白的生物学功能 | 第18-20
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· N 蛋白的免疫学特性研究 | 第20-21
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· N 蛋白与IBV 基因工程疫苗 | 第21-22
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· N 蛋白在血清抗体水平监测中的应用 | 第22
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· N 蛋白单克隆抗体研究 | 第22-23
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· 结语 | 第23-24
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第二章 鸡传染性支气管炎病毒陕西分离株N 基因的克隆及分子遗传变异分析 | 第24-42
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· 材料 | 第24-26
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· 毒株 | 第24-25
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· 载体及菌种 | 第25
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· 试剂及溶液配制 | 第25-26
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· 主要仪器 | 第26
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· 方法 | 第26-30
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· IBV 各分离毒株的引物设计 | 第26
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· 病毒增殖 | 第26
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· 病毒总RNA 提取 | 第26-27
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· 分离株 N 基因 RT-PCR | 第27
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· RT-PCR 产物的纯化回收 | 第27
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· RT-PCR 产物与T 载体连接 | 第27-28
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· 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28
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· 转化 | 第28
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· 重组质粒的提取 | 第28-29
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· IBV 分离株N 基因重组质粒的鉴定 | 第29
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· 各分离株N 基因序列测定与测定结果的鉴定 | 第29
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· IBV 分离株N 基因核苷酸序列及推导氨基酸序列分析 | 第29
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· IBV 分离株N 基因系统发生进化关系分析 | 第29-30
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· 结果 | 第30-39
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· 各毒株N 基因扩增结果 | 第30
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· N 基因克隆筛选的限制性酶切鉴定结果 | 第30-31
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· 各毒株N 基因序列测定结果 | 第31-36
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· 参考毒株在GenBank 中的登录号 | 第36
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· 各毒株N 基因与参考毒株核苷酸序列及氨基酸推导序列同源性比对 | 第36-37
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· IBV 分离株的N 蛋白氨基酸变异特征分析 | 第37-38
页 |
· IBV 分离株的N 基因系统发生进化关系分析 | 第38-39
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· 讨论 | 第39-40
页 |
· 小结 | 第40-42
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第三章 鸡肾型传染性支气管炎病毒W118 株主要结构基因的分子遗传特征 | 第42-51
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· 材料与方法 | 第42-44
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· 毒株 | 第42
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· 载体及菌种 | 第42
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· 试剂 | 第42
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· 引物设计 | 第42-43
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· 病毒RNA 提取及RT-PCR | 第43
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· IBV W118 株S1、M 和N 基因克隆与鉴定 | 第43
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· IBV W118 株S1、M 和N 基因序列测定 | 第43
页 |
· S1、M 和N 基因推倒氨基酸序列分析 | 第43
页 |
· S1、M 和N 基因与参考毒株序列比较及系统发生进化关系分析 | 第43-44
页 |
· 结果 | 第44-48
页 |
· IBV W118 株S1、M 和N 基因的扩增、克隆及鉴定 | 第44
页 |
· IBV W118 株S1、M 和N 基因的核苷酸序列测定 | 第44
页 |
· W118 株S1、M 和N 基因的分子特征及与参考毒株的比较分析 | 第44-46
页 |
· IBV W118 株与参考毒株S1 基因的同源性比较与进化树分析 | 第46-47
页 |
· IBV W118 株与参考毒株M 基因的同源性比较与系统进化分析 | 第47
页 |
· IBV W118 株与参考毒株N 基因的同源性比较与进化树分析 | 第47-48
页 |
· 讨论 | 第48-49
页 |
· W118 株S1、M 和N 基因变异特点 | 第48-49
页 |
· W118 株与其它参考毒株的可能关系、可能来源及研究意义 | 第49
页 |
· 小结 | 第49-51
页 |
第四章 传染性支气管炎病毒W118 株N 蛋白在大肠杆菌中的表达及其结构预测分析 | 第51-59
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· 材料与方法 | 第51-54
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· 菌株和质粒 | 第51
页 |
· 酶与试剂 | 第51-52
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· 阳性血清及酶标抗体 | 第52
页 |
· W118 株N 蛋白二级结构预测和抗原表位分析 | 第52
页 |
· 引物的设计与合成 | 第52
页 |
· N 基因的扩增与pMD18-T 载体连接 | 第52
页 |
· 原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第52
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· N 蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第52-53
页 |
· 表达蛋白的鉴定 | 第53-54
页 |
· 结果 | 第54-57
页 |
· W118 株N 蛋白二级结构和抗原表位 | 第54-55
页 |
· 重组原核表达载体N-pET32a 的酶切鉴定 | 第55-56
页 |
· 重组原核表达载体序列测定 | 第56
页 |
· 表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第56
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· 表达蛋白的Western-blot 检测 | 第56-57
页 |
· 讨论 | 第57-58
页 |
· 小结 | 第58-59
页 |
第五章 鸡传染性支气管炎病毒W118株N基因自杀性DNA免疫质粒的构建 | 第59-77
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· 材料与方法 | 第59-60
页 |
· 质粒及菌株 | 第59
页 |
· 酶与试剂 | 第59-60
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· 引物的设计与合成 | 第60
页 |
· N 基因的扩增与pMD18-T 载体连接 | 第60
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· N 基因DNA 免疫质粒的构建 | 第60
页 |
· N 基因DNA 免疫质粒序列测定 | 第60
页 |
· 结果 | 第60-61
页 |
· N 基因的扩增 | 第60-61
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· N 基因重组质粒的酶切鉴定 | 第61
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· N 基因DNA 免疫质粒的酶切鉴定 | 第61
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· N 基因DNA 免疫质粒的测序鉴定 | 第61
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· 讨论 | 第61-62
页 |
· 小结 | 第62-77
页 |
致谢 | 第77-78
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作者简介 | 第78
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