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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及表达产物在ELISA建立和单克隆抗体制备中的应用

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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及表达产物在ELISA建立和单克隆抗体制备中的应用
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-13页
第一章 猪圆环病毒研究进展第13-31页
  · 猪圆环病毒概述第13-22页
    · 猪圆环病毒的发现和命名第13页
    · 猪圆环病毒的病毒学分类地位第13-14页
    · 猪圆环病毒全球的流行和分布状况第14-15页
    · 猪圆环病毒的特性第15-16页
    · 猪圆环病毒的基因组第16页
    · 猪圆环病毒的复制与转录第16-17页
    · 猪圆环病毒编码蛋白的研究第17-19页
    · 组织病理学研究第19页
    · PCV2 相关疾病第19-22页
  · 猪2 型圆环病毒致病机理的研究进展第22-26页
    · 猪圆环病毒免疫应答情况研究进展第22-23页
    · 猪2 型圆环病毒致病机理的研究进展第23-26页
  · 猪圆环病毒检测方法的研究进展第26-28页
    · 病毒分离第26页
    · 间接免疫荧光试验(Immol/Lune fluorescence assay,IIF)第26页
    · 聚合酶链反应(Polymerase chain reaction ,PCR)第26-27页
    · 酶联免疫吸附试验(ELISA)第27页
    · 原位核酸杂交试验(ISH)第27-28页
  · PCV2 单克隆抗体的研究进展第28-29页
  · 猪圆环病毒感染的防制第29页
  · 论文设计思路及技术路线第29-31页
第二章 猪2 型圆环病毒ORF2 基因的原核表达第31-46页
  · 材料与方法第31-35页
    · 菌种和质粒第31页
    · 主要仪器第31-32页
    · 主要药品及试剂第32-35页
  · 方法第35-41页
    · 目的片段的扩增、纯化与回收第35-36页
      · PCR 产物回收(按TaKaRa 公司PCR 纯化试剂盒说明进行)第36页
    · 目的基因的克隆第36-37页
    · 重组质粒的提取与鉴定第37-39页
    · 重组ORF2 基因原核表达载体的构建第39页
    · 重组融合蛋白PET-32a-ORF2 的诱导表达及检测第39-40页
    · PET-32a-ORF2 表达蛋白的纯化与复性第40-41页
  · 结果第41-45页
    · PCR 扩增ORF2 基因电泳结果第41-42页
    · pMD18-T-ORF2 重组质粒的酶切鉴定第42页
    · 重组质粒pET-32a-ORF2 的酶切鉴定第42-43页
    · 重组质粒pET-32a-ORF2 在宿主菌中的诱导表达第43页
    · pET-32a-ORF2 表达产物western blot 鉴定第43-44页
    · pET-32a-ORF2 表达产物的纯化第44-45页
  · 讨论第45页
    · 表达区域的选择第45页
    · PCV2 ORF2 的纯化及复性第45页
  · 小结第45-46页
第三章 猪圆环病毒间接ELISA 检测方法的建立第46-53页
  · 材料第46-47页
    · 主要仪器设备第46页
    · ELISA 检测部分相关试剂的配制第46-47页
  · 方法第47-48页
    · 抗原包被浓度及抗体稀释度的确定第47页
    · 抗原包被条件的确定第47页
    · 封闭液的确定第47页
    · 酶标二抗稀释度的确定第47-48页
    · 血清最佳作用时间的确定第48页
    · 酶标二抗最佳作用时间的确定第48页
    · 显色时间的确定第48页
    · 重复性检验第48页
    · 阻断试验第48页
    · 符合率检验第48页
  · 结果与分析第48-52页
    · 抗原最适包被浓度和抗体最佳稀释度的确定第48-49页
    · 酶标二抗工作浓度的确定第49页
    · 血清及酶标二抗最佳反应时间的确定第49-50页
    · 封闭液的确定第50页
    · 包被条件的确定第50页
    · 显色时间的确定第50页
    · 重复性试验第50-51页
    · 阻断试验结果第51页
    · 符合率检验结果第51-52页
  · 讨论第52页
    · ELISA 工作条件的确定第52页
    · ELISA 方法的符合性、稳定性及特异性第52页
  · 小结第52-53页
第四章 CAP 蛋白多克隆抗体及单克隆抗体的制备第53-59页
  · 材料第53-54页
    · 试验动物第53页
    · 主要试剂及材料第53页
    · 主要器材第53-54页
  · 方法第54-56页
    · 多克隆抗体的制备第54页
    · 单克隆抗体的制备第54-56页
  · 结果与分析第56-57页
    · PCV2 ORF2 多克隆抗体效价测定结果第56-57页
    · 免疫小鼠的抗体测定结果第57页
    · 细胞融合及阳性杂交瘤细胞的筛选第57页
  · 讨论第57-58页
    · 动物免疫与抗血清的制备第57-58页
    · 抗体的检测第58页
  · 小结第58-59页
结论第59-60页
参考文献第60-68页
致谢第68-69页
作者简介第69 页

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