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猪瘟病毒NS3蛋白致PK-15细胞病变作用及转录靶向猪瘟病毒3’-UTR shRNA细胞株的建立

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猪瘟病毒NS3蛋白致PK-15细胞病变作用及转录靶向猪瘟病毒3’-UTR shRNA细胞株的建立
论文目录
 
中文摘要第1-6 页
英文摘要第6-12 页
文献综述第12-31 页
  第一章 猪瘟病毒研究进展第12-26 页
    · 猪瘟概述第12-13 页
    · 猪瘟病毒第13-14 页
      · CSFV 的形态第13 页
      · CSFV 的理化特征第13 页
      · CSFV 的抗原性、毒力和分型第13-14 页
      · CSFV 的培养细胞第14 页
    · CSFV 的分子生物学研究第14-26 页
      · CSFV 的基因组结构第14 页
      · 非翻译区第14-19 页
        · 5’-UTR第15-17 页
        · 3’-UTR第17-19 页
      · N53 蛋白第19-22 页
        · NS3 蛋白的蛋白酶功能第19-20 页
        · NS3 蛋白的NTPASE/HELICASE 功能第20-21 页
        · NS3 蛋白的其他研究第21-22 页
      · NS3 与致细胞病变型病毒第22-26 页
  第二章 RNA 干扰抗病毒的研究进展第26-31 页
    · RNA 干扰的发现第26 页
    · RNA 干扰的机制第26-27 页
    · RNAI 的特征第27 页
    · RNA 干扰的抗病毒应用第27-29 页
      · 以阻断宿主细胞表面受体功能抗病毒感染第28 页
      · 以抑制病毒复制抗病毒感染第28-29 页
    · RNAI 抗病毒作用面临的挑战第29-30 页
      · 病毒基因组核苷酸的快速变异介导的RNAI 屏蔽作用第29-30 页
      · 病毒产生蛋白质介导的RNAI 屏蔽作用第30 页
      · 病毒核衣壳介导的RNAI 屏蔽作用第30 页
      · 局部RNA 空间结构改变介导的RNAI 屏蔽作用第30 页
      · 病毒逃逸第30 页
    · 针对RNAI 抗性的一些解决办法第30-31 页
试验研究第31-66 页
  第三章 CSFV SHIMEN 株 N53 基因真核表达载体的构建与纯化第31-44 页
    · 材料第31-33 页
      · 质粒与菌株第31 页
      · 工具酶和主要试剂第31-33 页
        · 载体构建用工具酶和试剂第31 页
        · LB 培养基第31-32 页
        · 溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ第32 页
        · 饱和平衡酚/氯仿/异戊醇第32 页
        · 10×TE、50×TAE 缓冲液第32 页
        · 质粒纯化试剂第32 页
        · 细胞培养用试剂第32-33 页
        · 细胞消化试剂 ATV第33 页
      · 主要仪器与设备第33 页
    · 方法与步骤第33-38 页
      · NS3 片段的扩增与回收第33-35 页
        · CSFV 总RNA 的提取第33-34 页
        · 引物的设计与合成第34 页
        · RT-PCR 扩增第34-35 页
        · PCR 产物的回收第35 页
      · 目的基因的克隆第35-36 页
        · PCR 产物与PMD19-T SIMPLER VECTOR 的连接第35 页
        · 感受态细胞的制备第35 页
        · 连接产物的转化第35-36 页
      · 重组质粒的提取与鉴定第36-37 页
        · 重组质粒的提取第36 页
        · 重组质粒的鉴定第36-37 页
      · 重组表达载体的构建与鉴定第37 页
      · 阳性重组表达质粒及PEGFP-C1 质粒的纯化第37-38 页
    · 结果第38-41 页
      · RT-PCR 产物的电泳结果第38 页
      · 目的片段的克隆与鉴定第38-41 页
        · 重组质粒酶切鉴定结果第38-39 页
        · 重组质粒的测序鉴定结果第39-41 页
      · 重组表达质粒的鉴定与纯化结果第41 页
        · 重组表达质粒的酶切鉴定结果第41 页
        · 重组表达质粒及PEGFP-C1 质粒的纯化结果第41 页
    · 讨论第41-43 页
      · RT-PCR NS3 基因第41-42 页
      · PMD19-T SIMPLER VECTOR 和PEGFP-C1第42 页
      · 质粒纯化第42-43 页
    · 小结第43-44 页
  第四章 CSFV NS3 蛋白的表达及对 PK-15 细胞作用的研究第44-57 页
    · 材料第44-45 页
      · 质粒与细胞第44-45 页
      · 主要试剂第45 页
      · 仪器设备第45 页
    · 方法与步骤第45-49 页
      · 新霉素(G418)最佳筛选浓度的确定第45 页
      · PEGFP-N53 及PEGFP-C1 质粒转染 PK-15 细胞第45-46 页
      · G418 筛选及阳性细胞的获得第46 页
      · 表达蛋白的检测第46-49 页
        · SDS-PAGE 电泳第46-48 页
        · WESTERN BLOT 分析第48-49 页
      · N53 蛋白对宿主细胞PK-15 的作用研究第49 页
        · 显微镜检测第49 页
        · 细胞凋亡检测第49 页
    · 结果第49-53 页
      · 新霉素(G418)对PK-15 细胞最佳筛选浓度的确定第49 页
      · 转染成功的鉴定及转染条件的确定第49-50 页
      · 转染后阳性细胞的获得第50-51 页
      · 转染后NS3 表达蛋白检测结果第51 页
        · NS3 表达蛋白的SDS-PAGE 结果第51 页
        · NS3 表达蛋白的WESTERN-BLOT 结果第51 页
      · NS3 蛋白对宿主细胞PK-15 的作用研究结果第51-53 页
        · 显微镜观察结果第51-52 页
        · 细胞凋亡检测第52-53 页
    · 讨论第53-56 页
      · 脂质体介导的基因转染第53-54 页
      · G418 抗性筛选第54 页
      · 表达NS3 蛋白阳性细胞的获得第54-55 页
      · NS3 蛋白与细胞凋亡第55-56 页
    · 小结第56-57 页
  第五章 转录靶向CSFV 3’-UTR SHRNA 细胞株的建立第57-66 页
    · 材料第58 页
      · 质粒、毒株、菌株与细胞第58 页
      · 工具酶及主要试剂第58 页
      · 仪器与设备第58 页
    · 方法与步骤第58-60 页
      · 猪瘟病毒3’-UTR 干扰片段的设计第58-59 页
      · 重组干扰质粒的构建与鉴定第59 页
      · 重组干扰质粒的纯化第59 页
      · 重组干扰质粒的转染第59 页
      · G418 筛选及阳性细胞的获得第59 页
      · 稳定转录靶向猪瘟病毒3’-UTR SHRNA PK-15 细胞株的获得第59-60 页
    · 结果第60-63 页
      · 重组干扰质粒的鉴定第60 页
      · 重组干扰质粒的纯化第60-61 页
      · 重组干扰质粒转染结果第61 页
      · G418 筛选及阳性细胞的获得第61-62 页
      · 转录靶向猪瘟病毒3’-UTR SHRNA PK-15 细胞株的获得第62-63 页
    · 讨论第63-65 页
      · SIRNA 的制备第63-64 页
      · 靶向CSFV 3’-UTR 干扰位点的选择第64-65 页
    · 小结第65-66 页
结论第66-67 页
参考文献第67-76 页
致谢第76-77 页
个人简介第77 页

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