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猪瘟病毒E0基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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猪瘟病毒E0基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
前言第10-11页
文献综述第11-22页
　　第一章 猪瘟病毒研究进展第11-17页
　　　　· 猪瘟病毒分子生物学研究进展第11-13页
　　　　　　· 猪瘟病毒基因结构第11页
　　　　　　· 猪瘟病毒编码的蛋白第11-12页
　　　　　　· 猪瘟病毒编码的蛋白及其功能第12-13页
　　　　· 猪瘟病毒分子免疫学研究进展第13-17页
　　　　　　· 猪瘟病毒的体液免疫第13-15页
　　　　　　· 猪瘟病毒的细胞免疫学第15-17页
　　第二章 猪瘟诊断技术研究进展第17-22页
　　　　· 临床诊断第17页
　　　　· 实验室诊断第17-22页
　　　　　　· 病毒分离第17页
　　　　　　· 动物试验第17-18页
　　　　　　· 血清学诊断方法第18页
　　　　　　　　· 琼脂扩散试验（AGP）第18页
　　　　　　　　· 荧光抗体试验（FAT）第18页
　　　　　　　　· 间接血凝试验（IHA）第18页
　　　　　　· 中和试验第18-19页
　　　　　　　　· 兔体中和试验第18-19页
　　　　　　　　· 荧光抗体病毒中和试验（FAVN）第19页
　　　　　　　　· 过氧化物酶联中和试验（NPLA）第19页
　　　　　　· 酶联免疫吸附试验（ELISA）第19-20页
　　　　　　· 免疫胶体金技术（IGSS）第20页
　　　　　　· 分子生物学技术第20-22页
　　　　　　　　· RT-PCR 技术第20-21页
　　　　　　　　· 核酸探针技术第21页
　　　　　　　　· 基因芯片检测技术第21-22页
试验研究第22-55页
　　第三章 猪瘟病毒 E0 基因在大肠杆菌中的表达第22-39页
　　　　· 材料第22-25页
　　　　　　· 菌种和载体第22页
　　　　　　· 主要试剂第22页
　　　　　　· 主要仪器第22-23页
　　　　　　· 主要溶液配方第23-25页
　　　　· 方法第25-33页
　　　　　　· 引物的设计与合成第25-26页
　　　　　　· PCR 扩增第26页
　　　　　　· PCR 扩增产物的凝胶电泳第26页
　　　　　　· PCR 扩增产物的回收第26-27页
　　　　　　· 原核表达载体的构建第27-28页
　　　　　　　　· PCR 产物和载体酶切回收第27-28页
　　　　　　　　· 目的片段与载体的连接第28页
　　　　　　· BL21 感受态细胞的制备第28-29页
　　　　　　· 连接产物的转化第29-30页
　　　　　　· 碱裂解法小量提取质粒第30页
　　　　　　· 重组质粒的鉴定第30-31页
　　　　　　· 重组质粒的诱导表达第31页
　　　　　　· 最佳诱导条件的确定第31-32页
　　　　　　　　· IPTG 最佳诱导浓度的确定第31-32页
　　　　　　　　· 最佳诱导时间的确定第32页
　　　　　　· 表达产物的检测第32-33页
　　　　· 结果第33-37页
　　　　　　· PCR 扩增结果第33页
　　　　　　· 重组质粒pET-FJ237-E0 的鉴定结果第33-35页
　　　　　　　　· 重组质粒的酶切鉴定第33页
　　　　　　　　· 重组质粒的PCR 鉴定第33-34页
　　　　　　　　· 重组质粒的序列测定第34-35页
　　　　　　· 表达产物的SDS-PAGE 电泳检测第35-36页
　　　　　　　　· 不同IPTG 浓度的诱导表达第35页
　　　　　　　　· 不同时间的诱导表达第35-36页
　　　　　　· Western blot 分析第36-37页
　　　　· 讨论第37-38页
　　　　　　· CSFV E0 基因片段的扩增第37页
　　　　　　· pET-E0 表达重组质粒的构建第37页
　　　　　　· 目的蛋白的表达第37-38页
　　　　　　· 表达条件的优化第38页
　　　　　　· 重组蛋白的抗原性鉴定第38页
　　　　· 小结第38-39页
　　第四章 重组蛋白的纯化及猪瘟病毒 E0 抗原 间接 ELISA 方法的建立第39-55页
　　　　· 材料第39-41页
　　　　　　· 主要试剂及血清样品第39页
　　　　　　· 主要仪器设备第39页
　　　　　　· 用于蛋白纯化溶液的配制第39-40页
　　　　　　· ELISA 所用溶液第40-41页
　　　　· 方法第41-45页
　　　　　　· 重组蛋白的大量诱导表达第41页
　　　　　　· 目的蛋白存在情况检测第41页
　　　　　　· 镍柱的处理第41页
　　　　　　· 镍柱的再生第41-42页
　　　　　　· 目的蛋白的纯化第42页
　　　　　　· 纯化蛋白的浓缩第42-43页
　　　　　　· 重组蛋白浓度的测定及抗原性的测定第43页
　　　　　　· 重组蛋白间接ELISA 检测方法的初步研究第43-45页
　　　　　　　　· 棋盘滴定法选择抗原和血清的工作浓度第43页
　　　　　　　　· 最佳封闭液的确定第43页
　　　　　　　　· 最佳封闭时间的确定第43页
　　　　　　　　· 最佳血清及二抗反应时间的确定第43-44页
　　　　　　　　· 最佳底物反应时间的确定第44页
　　　　　　　　· 间接 ELISA 的特异性试验第44页
　　　　　　　　· 重复性试验第44页
　　　　　　　　· 临床样品的检测及符合性试验第44页
　　　　　　　　· 间接ELISA 的操作程序第44-45页
　　　　· 结果第45-51页
　　　　　　· 重组蛋白的制备及纯化第45-46页
　　　　　　· 重组蛋白浓度的计算及抗原性测定第46-47页
　　　　　　· 间接ELISA 方法的初步建立第47-51页
　　　　　　　　· 棋盘滴定法选择抗原和血清的工作浓度第47-48页
　　　　　　　　· 间接ELISA 各项试验条件的优化第48页
　　　　　　　　· 阴阳性临界值的确定第48-51页
　　　　· 讨论第51-54页
　　　　　　· 选用猪瘟流行毒株 pET-FJ E0 蛋白建立 ELISA 诊断方法的意义第51-52页
　　　　　　· 目的蛋白存在形式检测第52页
　　　　　　· 目的蛋白的纯化第52页
　　　　　　· 间接ELISA 方法的建立第52-54页
　　　　· 小结第54-55页
结论第55-56页
参考文献第56-61页
致谢第61-62页
作者简介第62 页

本篇论文共62页，点击这进入下载页面。
 
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