论文目录 | |
摘要 | 第1-6
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ABSTRACT | 第6-10
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第一章 文献综述 | 第10-22
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· 蛋白质修饰的研究进展 | 第10-12
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· 蛋白质泛素化的研究进展 | 第12-13
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· 蛋白质类泛素化途径的研究进展 | 第13
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· SUMO 化途径的研究进展 | 第13-20
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· SUMO 家族概述 | 第13-14
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· SUMO 化修饰和去SUMO 化修饰 | 第14-16
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· SUMO 蛋白的功能 | 第16-18
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· SUMO 第一类家族的研究进展 | 第18-20
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· 抗体制备的研究概况 | 第20-21
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· 本研究目的与意义 | 第21-22
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第二章 人SUMO-1 蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第22-39
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· 材料 | 第22
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· 主要试剂 | 第22-24
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· 原核表达载体构建方面 | 第22-23
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· 蛋白表达和纯化方面 | 第23-24
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· 仪器 | 第24
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· 方法 | 第24-31
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· 引物的设计和SUMO-1 片段的扩增 | 第24-25
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· 凝胶中回收质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 产物 | 第25-26
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· 酶切质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 回收产物 | 第26
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· 酶切载体质粒pET-41a | 第26
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· 溶液中回收酶切产物 | 第26-27
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· 酶切后PCR 产物与pET-41a 载体连接 | 第27
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· Inoue 法制备超级感受态细胞(DH5α) | 第27
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· 转化 | 第27
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· 抽提重组质粒pET41a-SUM01(pET-S1) | 第27-28
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· 重组质粒pET41a-SUM01 酶切鉴定 | 第28
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· 重组质粒pET41a-SUM01-SUM01(pET-SS1)的构建 | 第28
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· 目的基因的原核表达 | 第28-29
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· 菌体总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29
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· 菌体总蛋白的Western blotting 分析 | 第29-30
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· 表达产物可溶性鉴定 | 第30
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· 融合蛋白的大量制备及纯化 | 第30-31
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· 结果与分析 | 第31-35
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· pET-S1、pET-SS1 原核表达载体的构建与鉴定 | 第31-32
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· 不同温度下IPTG 诱导重组质粒pET-SS1 和pET-S1 | 第32-33
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· 不同IPTG 浓度下诱导重组质粒pET-SS1 | 第33-34
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· 重组蛋白GST-S1 和SUMO-1 蛋白的纯化 | 第34-35
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· 讨论 | 第35-37
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· 关于SUMO-1 蛋白的PCR 扩增和载体选择方面 | 第35-36
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· 目的蛋白诱导表达及纯化方面 | 第36-37
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· 结论 | 第37-39
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第三章 人SUMO-1 蛋白多克隆抗体制备及鉴定 | 第39-48
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· 主要材料及试剂 | 第39-40
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· 主要仪器 | 第40
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· 实验方法 | 第40-41
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· 兔抗人SUMO-1 多克隆抗体的制备 | 第40
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· ELISA 方法检测抗体的效价 | 第40-41
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· 抗血清的纯化 | 第41
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· 多克隆抗体鉴定 | 第41
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· 结果与分析 | 第41-44
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· Western Blotting 方法检测多克隆抗体 | 第41-42
页 |
· ELISA 法检测抗体的效价及比较 | 第42-43
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· Hela 细胞内源性SUMO-1 蛋白Western blot 检测 | 第43-44
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· 讨论 | 第44-46
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· 关于提高抗血清效价的方法 | 第44-46
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· 关于Western blot 的检测的讨论 | 第46
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· 关于ELISA 实验 | 第46
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· 结论 | 第46-48
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第四章 人SUMO-1 蛋白真核表达载体的构建、亚细胞结构的定位 | 第48-57
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· 材料 | 第48
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· 主要试剂及仪器 | 第48-49
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· 真核表达载体构建方面 | 第48
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· 亚细胞结构定位方面 | 第48-49
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· 方法 | 第49-51
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· 真核表达载体pCMV-HA-SUM01(HA-S1)和pCMV-Myc-SUM01(Myc-S1)的构建 | 第49
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· 真核表达载体pEGFP-C1-SUM01(GFP-S1)和pDsRed-C1-SUM01(Red-S1)的构建 | 第49
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· Hela 细胞的传代培养 | 第49-50
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· Hela 细胞的脂质体瞬时转染(24 孔板/6 孔板) | 第50
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· 真核表达载体Myc-S1、GFP-S1 和Red-S1 的表达 | 第50-51
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· SUMO-1 蛋白的亚细胞结构定位 | 第51
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· SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用 | 第51
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· 结果与分析 | 第51-55
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· 真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 构建示意图 | 第51
页 |
· 真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 的构建及鉴定 | 第51-52
页 |
· 真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 构建示意图 | 第52-53
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· 真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 的构建及酶切鉴定 | 第53
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· 真核表达载体Myc-S1 在Hela 细胞中的表达检测 | 第53-54
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· SUMO-1 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位 | 第54
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· SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用 | 第54-55
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· 讨论 | 第55
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· 结论 | 第55-57
页 |
总结 | 第57-58
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参考文献 | 第58-62
页 |
附图 | 第62-67
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致谢 | 第67-68
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作者简历 | 第68
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