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人SUMO-1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定及亚细胞结构的定位

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人SUMO-1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定及亚细胞结构的定位
论文目录
 
摘要第1-6 页
ABSTRACT第6-10 页
第一章 文献综述第10-22 页
  · 蛋白质修饰的研究进展第10-12 页
  · 蛋白质泛素化的研究进展第12-13 页
  · 蛋白质类泛素化途径的研究进展第13 页
  · SUMO 化途径的研究进展第13-20 页
    · SUMO 家族概述第13-14 页
    · SUMO 化修饰和去SUMO 化修饰第14-16 页
    · SUMO 蛋白的功能第16-18 页
    · SUMO 第一类家族的研究进展第18-20 页
  · 抗体制备的研究概况第20-21 页
  · 本研究目的与意义第21-22 页
第二章 人SUMO-1 蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化第22-39 页
  · 材料第22 页
  · 主要试剂第22-24 页
    · 原核表达载体构建方面第22-23 页
    · 蛋白表达和纯化方面第23-24 页
  · 仪器第24 页
  · 方法第24-31 页
    · 引物的设计和SUMO-1 片段的扩增第24-25 页
    · 凝胶中回收质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 产物第25-26 页
    · 酶切质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 回收产物第26 页
    · 酶切载体质粒pET-41a第26 页
    · 溶液中回收酶切产物第26-27 页
    · 酶切后PCR 产物与pET-41a 载体连接第27 页
    · Inoue 法制备超级感受态细胞(DH5α)第27 页
    · 转化第27 页
    · 抽提重组质粒pET41a-SUM01(pET-S1)第27-28 页
    · 重组质粒pET41a-SUM01 酶切鉴定第28 页
    · 重组质粒pET41a-SUM01-SUM01(pET-SS1)的构建第28 页
    · 目的基因的原核表达第28-29 页
    · 菌体总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第29 页
    · 菌体总蛋白的Western blotting 分析第29-30 页
    · 表达产物可溶性鉴定第30 页
    · 融合蛋白的大量制备及纯化第30-31 页
  · 结果与分析第31-35 页
    · pET-S1、pET-SS1 原核表达载体的构建与鉴定第31-32 页
    · 不同温度下IPTG 诱导重组质粒pET-SS1 和pET-S1第32-33 页
    · 不同IPTG 浓度下诱导重组质粒pET-SS1第33-34 页
    · 重组蛋白GST-S1 和SUMO-1 蛋白的纯化第34-35 页
  · 讨论第35-37 页
    · 关于SUMO-1 蛋白的PCR 扩增和载体选择方面第35-36 页
    · 目的蛋白诱导表达及纯化方面第36-37 页
  · 结论第37-39 页
第三章 人SUMO-1 蛋白多克隆抗体制备及鉴定第39-48 页
  · 主要材料及试剂第39-40 页
  · 主要仪器第40 页
  · 实验方法第40-41 页
    · 兔抗人SUMO-1 多克隆抗体的制备第40 页
    · ELISA 方法检测抗体的效价第40-41 页
    · 抗血清的纯化第41 页
    · 多克隆抗体鉴定第41 页
  · 结果与分析第41-44 页
    · Western Blotting 方法检测多克隆抗体第41-42 页
    · ELISA 法检测抗体的效价及比较第42-43 页
    · Hela 细胞内源性SUMO-1 蛋白Western blot 检测第43-44 页
  · 讨论第44-46 页
    · 关于提高抗血清效价的方法第44-46 页
    · 关于Western blot 的检测的讨论第46 页
    · 关于ELISA 实验第46 页
  · 结论第46-48 页
第四章 人SUMO-1 蛋白真核表达载体的构建、亚细胞结构的定位第48-57 页
  · 材料第48 页
  · 主要试剂及仪器第48-49 页
    · 真核表达载体构建方面第48 页
    · 亚细胞结构定位方面第48-49 页
  · 方法第49-51 页
    · 真核表达载体pCMV-HA-SUM01(HA-S1)和pCMV-Myc-SUM01(Myc-S1)的构建第49 页
    · 真核表达载体pEGFP-C1-SUM01(GFP-S1)和pDsRed-C1-SUM01(Red-S1)的构建第49 页
    · Hela 细胞的传代培养第49-50 页
    · Hela 细胞的脂质体瞬时转染(24 孔板/6 孔板)第50 页
    · 真核表达载体Myc-S1、GFP-S1 和Red-S1 的表达第50-51 页
    · SUMO-1 蛋白的亚细胞结构定位第51 页
    · SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用第51 页
  · 结果与分析第51-55 页
    · 真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 构建示意图第51 页
    · 真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 的构建及鉴定第51-52 页
    · 真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 构建示意图第52-53 页
    · 真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 的构建及酶切鉴定第53 页
    · 真核表达载体Myc-S1 在Hela 细胞中的表达检测第53-54 页
    · SUMO-1 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位第54 页
    · SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用第54-55 页
  · 讨论第55 页
  · 结论第55-57 页
总结第57-58 页
参考文献第58-62 页
附图第62-67 页
致谢第67-68 页
作者简历第68 页

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