论文目录 | |
摘要 | 第1-6
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ABSTRACT | 第6-10
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第一章 文献综述 | 第10-15
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· MGC5306 的研究进展 | 第10-14
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· MGC5306 的细胞定位 | 第10
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· MGC5306 的基因结构 | 第10-11
页 |
· MGC5306 与其他蛋白的相互作用 | 第11-12
页 |
· MGC5306 的生物学功能 | 第12
页 |
· MGC5306 在肿瘤发生中的潜在作用 | 第12-14
页 |
· 抗体制备的研究概况 | 第14
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· 本研究目的与意义 | 第14-15
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第二章 MGC5306 蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第15-32
页 |
· 实验材料 | 第15
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· 实验试剂 | 第15-17
页 |
· 有关原核表达载体的构建 | 第15-16
页 |
· 有关蛋白表达与纯化 | 第16-17
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· 实验仪器 | 第17-18
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· 实验方法 | 第18-25
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· 引物的设计与合成 | 第18
页 |
· 通过PCR 扩增引物 | 第18
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· 凝胶中回收质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 产物 | 第18-19
页 |
· 酶切质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 回收产物 | 第19
页 |
· 酶切载体质粒pGEX-4T-1 (+) | 第19-20
页 |
· DNA 快速纯化回收试剂盒从溶液中回收酶切产物 | 第20
页 |
· 酶切后PCR 产物与pGEX-4T-1 (+)载体连接 | 第20
页 |
· CaCl 2 法制备感受态细胞(DH5α) | 第20-21
页 |
· 转化 | 第21
页 |
· 抽提重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第21
页 |
· 重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 酶切鉴定 | 第21-22
页 |
· 表达条件的优化和目的基因的原核表达 | 第22-23
页 |
· 菌体表达总蛋白的Western Blot 分析 | 第23
页 |
· 验证表达蛋白是否为可溶性蛋白 | 第23-24
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· 融合蛋白的大量制备及纯化 | 第24-25
页 |
· 结果与分析 | 第25-29
页 |
· MGC5306(98-204AA)基因的扩增 | 第25
页 |
· pGEX-4T-1-MGC5306 原核表达载体的构建与鉴定 | 第25-27
页 |
· 表达蛋白是否为可溶性蛋白的验证 | 第27-28
页 |
· 在不同的温度下IPTG 诱导重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第28
页 |
· 不同IPTG 浓度下诱导重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第28-29
页 |
· 重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 在大肠杆菌E.coli.BL21(DE3) plysS 中的诱导表达和纯化 | 第29
页 |
· 讨论 | 第29-31
页 |
· 有关MGC5306 基因的PCR 扩增与载体的选择 | 第29-30
页 |
· 有关目的蛋白的诱导表达和纯化 | 第30-31
页 |
· 结论 | 第31-32
页 |
第三章 MGC5306 蛋白多克隆抗体制备及鉴定 | 第32-38
页 |
· 材料和试剂 | 第32-33
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· 实验仪器 | 第33
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· 实验方法 | 第33-34
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· 兔抗MGC5306 蛋白多克隆抗体的制备 | 第33
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· 用ELISA 方法来检测抗血清的效价 | 第33-34
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· 对抗血清进行纯化 | 第34
页 |
· 原核表达蛋白的Western Blotting 检测 | 第34
页 |
· 结果与分析 | 第34-36
页 |
· Western Blot 方法检测多克隆抗体 | 第34-35
页 |
· 用ELISA 方法来检测抗体的效价 | 第35-36
页 |
· 讨论 | 第36-37
页 |
· 有关多克隆抗体的制备和提高抗血清效价的方法 | 第36-37
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· 关于ELISA 实验 | 第37
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· 有关多克隆抗体的鉴定和Western blot 检测 | 第37
页 |
· 结论 | 第37-38
页 |
第四章 MGC5306 蛋白真核表达载体的构建及亚细胞结构的定位 | 第38-44
页 |
· 材料 | 第38
页 |
· 试剂和仪器 | 第38-39
页 |
· 有关真核表达载体构建 | 第38
页 |
· 亚细胞结构定位方面 | 第38-39
页 |
· 方法 | 第39-41
页 |
· 真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建 | 第39
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· 对Hela 细胞进行传代培养 | 第39-40
页 |
· Hela 细胞的脂质体瞬时转染(24 孔板/6 孔板) | 第40
页 |
· MGC5306 蛋白的亚细胞结构定位 | 第40-41
页 |
· 结果与分析 | 第41-42
页 |
· 真核表达载体pDsRed-C1-MGC5306 构建示意图 | 第41
页 |
· 真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建及鉴定 | 第41-42
页 |
· MGC5306 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位 | 第42
页 |
· 讨论 | 第42-43
页 |
· 结论 | 第43-44
页 |
结论 | 第44-45
页 |
参考文献 | 第45-49
页 |
附图 | 第49-51
页 |
致谢 | 第51-52
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作者简介 | 第52
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