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在抗体免疫选择压下ALV-Jgp85基因的变异及中国野毒株的分离鉴定

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在抗体免疫选择压下ALV-Jgp85基因的变异及中国野毒株的分离鉴定
论文目录
 
中文摘要第1-11 页
英文摘要第11-14 页
引言第14-26 页
  1 禽白血病病毒的基本概况第14-15 页
  2 ALV-J分子病毒学特性第15-16 页
  3 ALV-J的致病性及其免疫抑制作用第16-18 页
  4 ALV-J的鉴别与诊断第18-21 页
  5 ALV-J囊膜糖蛋白基因的变异第21-22 页
  6 免疫选择压对病毒演化的影响第22-23 页
  7 ALV-J的控制与消灭第23 页
  8 本研究的目的及意义第23-25 页
  9 附图第25-26 页
研究内容第26-78 页
  试验一 在抗体免疫选择压作用下鸡J亚群白血病病毒gp85基因的变异第26-40 页
    1 材料与方法第26-33 页
      · 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第26 页
      · ALV-J中国分离株NX0101第26 页
      · 单克隆抗体第26 页
      · 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠和兔抗鸡二抗第26-27 页
      · 引物第27 页
      · 鸡抗ALV-J NX0101单因子血清的制备及其效价的测定第27-28 页
      · 单因子血清中ALV-J病毒的检测第28 页
      · 抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价第28 页
      · ALV-J NX0101株单因子血清的病毒中和试验第28 页
      · 在含有单因子血清的CEF上NX0101株的连续传代第28-29 页
      · 第10代、20代和30代病毒env基因的扩增、克隆与测序第29-33 页
        · 克隆载体和宿主菌第29 页
        · 分子生物学试剂第29 页
        · 第10代、20代和30代病毒模板的制备第29 页
        · 第10代、20代和30代病毒env基因的扩增第29-30 页
        · 第10代、20代和30代病毒env基因PCR产物DNA电泳第30-31 页
        · PCR产物的回收与定量第31 页
        · DNA的连接反应第31 页
        · TG1大肠杆菌感受态细胞的制备第31-32 页
        · 连接产物的转化第32 页
        · 质粒DNA的提取第32-33 页
        · 重组质粒DNA的酶切鉴定第33 页
        · 阳性克隆序列测定第33 页
    2 结果第33-40 页
      · 鸡抗NX0101株病毒单因子血清的效价第33-34 页
      · 单因子血清中ALV-J病毒的检测第34 页
      · 培养基中不完全抑制ALV-J复制的最适血清浓度的确定第34 页
      · 抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价第34 页
      · 第10代、20代和30代病毒env基因PCR扩增结果第34 页
      · 第10代、20代和30代病毒env基因重组质粒的双酶切鉴定结果第34-35 页
      · 在不含抗体培养基上连续传代病毒gp85基因的变异第35-36 页
      · 在含抗体的培养基上连续传代病毒gp85基因的变异第36-37 页
      · 原代病毒分别与有、无抗体组gp85氨基酸序列差异性程度比较第37-38 页
      · 不同传代系列高变区上重复变异位点的规律第38 页
      · gp85及其3个高变区上NS与S的比值第38-40 页
  试验一 附图第40-52 页
  试验二 ALV-J田间野毒株的分离鉴定及1999-2003年期间我国ALV-J野毒株gp85基因变异趋势第52-78 页
    1 材料与方法第52-60 页
      · 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第52 页
      · 病料来源第52 页
      · 单克隆抗体第52 页
      · 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠二抗第52 页
      · 引物第52-53 页
      · 阳性对照ALV-J病毒第53 页
      · 病毒分离鉴定第53-56 页
        · 病毒分离与复制第53 页
        · 间接免疫荧光试验(IFA)第53-54 页
        · 细胞DNA的提取第54-55 页
        · 特异性2.2kb条带扩增第55-56 页
        · PCR产物DNA电泳第56 页
      · env基因的克隆与测序第56-59 页
        · 克隆载体和宿主菌第56 页
        · 分子生物学试剂第56 页
        · PCR产物的回收与定量第56-57 页
        · DNA的连接反应第57 页
        · TG1大肠杆菌感受态细胞的制备第57 页
        · 连接产物的转化第57-58 页
        · 质粒DNA的提取第58-59 页
        · 重组质粒DNA的酶切鉴定第59 页
        · 阳性克隆序列测定第59 页
      · 1999—2003年期间分离的中国野毒株的背景第59-60 页
    2 结果第60-72 页
      · 用ALV-J特异性单克隆抗体IFA检测结果第60 页
      · 特异性·kb条带扩增结果第60-61 页
      · 重组质粒的双酶切鉴定结果第61 页
      · 14个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列分析第61 页
      · 十四个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列的同源性比较第61-63 页
      · 14株中国野毒株Gp85蛋白的氨基酸序列的遗传进化关系第63 页
      · ALV-J中国野毒株的变异趋势第63 页
      · 免疫选择压对gp85基因变异的影响第63-65 页
      附图第65-72 页
    3.讨论第72-78 页
      · 试验一讨论第72-74 页
      · 试验2讨论第74-78 页
结论第78-80 页
参考文献第80-85 页
致谢第85-86 页
攻读硕士研究生期间的论文情况第86 页

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