论文目录 | |
中文摘要 | 第1-11
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英文摘要 | 第11-14
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引言 | 第14-26
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1 禽白血病病毒的基本概况 | 第14-15
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2 ALV-J分子病毒学特性 | 第15-16
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3 ALV-J的致病性及其免疫抑制作用 | 第16-18
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4 ALV-J的鉴别与诊断 | 第18-21
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5 ALV-J囊膜糖蛋白基因的变异 | 第21-22
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6 免疫选择压对病毒演化的影响 | 第22-23
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7 ALV-J的控制与消灭 | 第23
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8 本研究的目的及意义 | 第23-25
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9 附图 | 第25-26
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研究内容 | 第26-78
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试验一 在抗体免疫选择压作用下鸡J亚群白血病病毒gp85基因的变异 | 第26-40
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1 材料与方法 | 第26-33
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· 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第26
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· ALV-J中国分离株NX0101 | 第26
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· 单克隆抗体 | 第26
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· 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠和兔抗鸡二抗 | 第26-27
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· 引物 | 第27
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· 鸡抗ALV-J NX0101单因子血清的制备及其效价的测定 | 第27-28
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· 单因子血清中ALV-J病毒的检测 | 第28
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· 抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价 | 第28
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· ALV-J NX0101株单因子血清的病毒中和试验 | 第28
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· 在含有单因子血清的CEF上NX0101株的连续传代 | 第28-29
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· 第10代、20代和30代病毒env基因的扩增、克隆与测序 | 第29-33
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· 克隆载体和宿主菌 | 第29
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· 分子生物学试剂 | 第29
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· 第10代、20代和30代病毒模板的制备 | 第29
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· 第10代、20代和30代病毒env基因的扩增 | 第29-30
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· 第10代、20代和30代病毒env基因PCR产物DNA电泳 | 第30-31
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· PCR产物的回收与定量 | 第31
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· DNA的连接反应 | 第31
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· TG1大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32
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· 连接产物的转化 | 第32
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· 质粒DNA的提取 | 第32-33
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· 重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第33
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· 阳性克隆序列测定 | 第33
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2 结果 | 第33-40
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· 鸡抗NX0101株病毒单因子血清的效价 | 第33-34
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· 单因子血清中ALV-J病毒的检测 | 第34
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· 培养基中不完全抑制ALV-J复制的最适血清浓度的确定 | 第34
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· 抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价 | 第34
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· 第10代、20代和30代病毒env基因PCR扩增结果 | 第34
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· 第10代、20代和30代病毒env基因重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第34-35
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· 在不含抗体培养基上连续传代病毒gp85基因的变异 | 第35-36
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· 在含抗体的培养基上连续传代病毒gp85基因的变异 | 第36-37
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· 原代病毒分别与有、无抗体组gp85氨基酸序列差异性程度比较 | 第37-38
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· 不同传代系列高变区上重复变异位点的规律 | 第38
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· gp85及其3个高变区上NS与S的比值 | 第38-40
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试验一 附图 | 第40-52
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试验二 ALV-J田间野毒株的分离鉴定及1999-2003年期间我国ALV-J野毒株gp85基因变异趋势 | 第52-78
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1 材料与方法 | 第52-60
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· 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第52
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· 病料来源 | 第52
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· 单克隆抗体 | 第52
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· 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠二抗 | 第52
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· 引物 | 第52-53
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· 阳性对照ALV-J病毒 | 第53
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· 病毒分离鉴定 | 第53-56
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· 病毒分离与复制 | 第53
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· 间接免疫荧光试验(IFA) | 第53-54
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· 细胞DNA的提取 | 第54-55
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· 特异性2.2kb条带扩增 | 第55-56
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· PCR产物DNA电泳 | 第56
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· env基因的克隆与测序 | 第56-59
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· 克隆载体和宿主菌 | 第56
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· 分子生物学试剂 | 第56
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· PCR产物的回收与定量 | 第56-57
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· DNA的连接反应 | 第57
页 |
· TG1大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第57
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· 连接产物的转化 | 第57-58
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· 质粒DNA的提取 | 第58-59
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· 重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第59
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· 阳性克隆序列测定 | 第59
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· 1999—2003年期间分离的中国野毒株的背景 | 第59-60
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2 结果 | 第60-72
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· 用ALV-J特异性单克隆抗体IFA检测结果 | 第60
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· 特异性·kb条带扩增结果 | 第60-61
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· 重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第61
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· 14个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列分析 | 第61
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· 十四个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列的同源性比较 | 第61-63
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· 14株中国野毒株Gp85蛋白的氨基酸序列的遗传进化关系 | 第63
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· ALV-J中国野毒株的变异趋势 | 第63
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· 免疫选择压对gp85基因变异的影响 | 第63-65
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附图 | 第65-72
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3.讨论 | 第72-78
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· 试验一讨论 | 第72-74
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· 试验2讨论 | 第74-78
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结论 | 第78-80
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参考文献 | 第80-85
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致谢 | 第85-86
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攻读硕士研究生期间的论文情况 | 第86
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