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牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立
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牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立
论文目录
 
中文摘要第1-10 页
英文摘要第10-12 页
引言第12-36 页
　　一、牛传染性鼻气管炎及牛疱疹病毒 I 型第12-20 页
　　二、牛传染性鼻气管病毒分子生物学研究第20-22 页
　　三、牛传染性鼻气管诊断技术的研究现状及进展第22-25 页
　　四、昆虫杆状病毒和表达载体第25-35 页
　　五、本实验目的和意义第35-36 页
试验一 牛疱疹病毒I 型gB 基因的原核表达第36-61 页
　　1材料与方法第36-49 页
　　　　· 材料第36-42 页
　　　　· 方法第42-49 页
　　　　　　· 引物的设计与合成第42 页
　　　　　　· BHV-1 gB 基因的扩增第42 页
　　　　　　· BHV-1 gB 基因的克隆第42-44 页
　　　　　　· 碱裂解法提取质粒 DNA第44 页
　　　　　　· 重组质粒的鉴定第44-45 页
　　　　　　· gB 表达序列扩增第45 页
　　　　　　· 原核重组表达质粒的构建第45 页
　　　　　　· 序列测定第45 页
　　　　　　· 诱导表达第45-46 页
　　　　　　· 表达产物的纯化第46-48 页
　　　　　　· 重组蛋白的 Western-blot 分析第48-49 页
　　2 结果第49-56 页
　　　　· gB 完整基因的扩增及克隆鉴定第49 页
　　　　· 双酶切鉴定重组质粒第49-50 页
　　　　· 表达产物的检测和SDS-PAGE分析第50 页
　　　　· 亲和层析纯化结果第50-53 页
　　　　· 目的蛋白电洗脱纯化结果第53-54 页
　　　　· Western-blot 检测结果第54-56 页
　　3 讨论第56-61 页
试验二gBg、E 基因真核表达载体的构建第61-71 页
　　1 材料与方法第61-64 页
　　　　· 材料第61-62 页
　　　　· 方法第62-64 页
　　　　　　· 细胞的复苏传代及冻存第62 页
　　　　　　· gB、gE 基因表达片段的获取及其纯化第62-63 页
　　　　　　· 重组转座质粒的构建与鉴定第63 页
　　　　　　· 重组杆状病毒穿梭质粒的获得及其鉴定第63-64 页
　　2 结果第64-67 页
　　　　· 目的基因片段的扩增第64-65 页
　　　　· 基因片段克隆鉴定第65-66 页
　　　　· 重组转座载体的鉴定与分析第66 页
　　　　· 重组杆状病毒穿梭载体BacmidgB、BacmidgE 的鉴定第66-67 页
　　3 讨论第67-71 页
　　　　· 昆虫杆状病毒表达载体的优越性第68-69 页
　　　　· 影响外源基因表达水平的因素第69-71 页
试验三 间接 ELISA 检测传染性鼻气管炎抗体方法的建立第71-78 页
　　1 材料与方法第71-73 页
　　　　· 材料与试剂第71 页
　　　　· 方法第71-73 页
　　　　　　· 间接gB-ELISA 操作程序第71-72 页
　　　　　　· 二抗工作浓度的确定第72 页
　　　　　　· 表达产物的抗原性分析第72 页
　　　　　　· 最适抗原包被量的确定第72 页
　　　　　　· 血清最适工作浓度的确定第72-73 页
　　　　　　· 间接 ELISA 判定标准的获得第73 页
　　　　　　· 特异性试验第73 页
　　　　　　· 对比试验第73 页
　　2 结果第73-76 页
　　　　· 二抗工作浓度第73 页
　　　　· 反应原性分析第73-74 页
　　　　· 抗原最适包被量第74 页
　　　　· 血清工作浓度第74-75 页
　　　　· ELISA 结果判定标准第75 页
　　　　· 间接 ELISA 特异性检测结果第75 页
　　　　· 对比试验结果第75-76 页
　　3 讨论第76-78 页
结论第78-79 页
参考文献第79-88 页
致谢第88-89 页
攻读学位期间发表论文情况第89 页

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