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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及免疫原性分析

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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及免疫原性分析
论文目录
 
符号说明第1-9 页
中文摘要第9-11 页
英文摘要第11-13 页
1 引言第13-36 页
  · 猪传染性胃肠炎的研究进展第13-24 页
  · 巴斯德毕赤酵母表达系统在异源蛋白表达中的应用第24-29 页
  · 花青素的药理作用研究进展第29-34 页
  · 研究的目的、意义第34-36 页
2 材料与方法第36-56 页
  · 材料第36-42 页
    · 药物第36 页
    · 毒株、菌株、细胞和质粒第36 页
    · 酶和试剂第36-37 页
    · 引物设计与合成第37 页
    · 试验所用溶液及其配制第37-41 页
    · 主要实验仪器设备及耗材第41-42 页
  · 花青素体外抗 TGEV 的试验研究方法第42-46 页
    · ST cell 的复苏与培养第42 页
    · TGEV 病毒的增殖第42 页
    · 病毒基因组 RNA 的提取第42 页
    · RT-PCR 鉴定第42-43 页
    · 免疫过氧化物酶单层实验(IPMA)第43-44 页
    · 病毒TCID_(50)的测定第44-45 页
    · 花青素对ST细胞的毒性作用-细胞形态学观察第45-46 页
      · 花青素对ST细胞上贴壁的影响第45 页
      · 花青素对ST单层细胞的影响第45-46 页
      · 花青素在ST细胞上最大安全浓度的确定第46 页
    · 花青素在ST细胞上对抗TGEV的最佳用量的确定第46 页
      · 药物的稀释第46 页
      · TGEV 的稀释第46 页
      · 细胞的培养与病毒接种第46 页
    · 花青素在细胞上对TGEV的抑制作用第46 页
  · 猪传染性胃肠炎病毒 S 蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 及免疫原性分析的方法第46-56 页
    · 目的基因的 PCR 扩增第46-47 页
    · PCR 产物的回收第47 页
    · 克隆载体TS的构建与鉴定第47-49 页
      · 目的片段与pBS-T载体的连接第47-48 页
      · 连接产物的转化第48 页
      · 质粒DNA的少量制备-碱法提取质粒第48-49 页
      · 重组质粒的鉴定第49 页
    · 表达载体pPIC9K-S 的构建和鉴定第49-50 页
      · 表达载体pPIC9K-S 的构建第49 页
      · 连接产物的转化第49 页
      · 表达载体pPIC9K-S 的鉴定第49-50 页
    · 重组表达载体转化毕赤酵母G5115 感受态第50-51 页
      · 毕赤酵母G5115 感受态的制备第50 页
      · 重组表达载体的线性化第50 页
      · 线性化产物的回收第50-51 页
      · 电转化第51 页
    · 酵母阳性整合子的筛选第51-52 页
      · 利用 G418 筛选第51 页
      · 利用 PCR 筛选第51-52 页
    · 阳性整合子的诱导表达及最佳表达表达时间的确定第52-53 页
    · S 蛋白的SDS-PAGE 检测第53 页
    · Western-blotting 检测第53 页
    · 目的蛋白质的纯化-阴离子交换层析第53-54 页
    · SDS-PAGE 电泳检测纯化后收集的组分第54 页
    · 超滤管纯化目的蛋白第54-55 页
      · 最佳超离心膜的孔径确定-微量超滤管第54-55 页
      · 15ml 超滤管大批量纯化蛋白第55 页
    · 纯化蛋白的动物免疫第55 页
    · 纯化蛋白免疫动物的抗体检测第55-56 页
      · 核酸蛋白检测 TGEV 全病毒血清第55-56 页
      · 检测鼠抗 TGEV S 蛋白抗体的间接ELISA 方法的建立第56 页
3 结果与分析第56-71 页
  · 病毒的增殖第56-57 页
  · RT-PCR 结果第57 页
  · 免疫过氧化物酶单层实验(IPMA)结果第57-58 页
  · TCID_(50)测定结果第58-59 页
  · 花青素对ST细胞贴壁的影响第59 页
  · 花青素对ST单层细胞的影响第59-61 页
  · 花青素在ST细胞上最大安全浓度的确定第61 页
  · 花青素在细胞上对抗TGEV的最佳用量的确定第61-62 页
  · 花青素在ST细胞上对TGEV的抑制作用第62 页
  · 目的基因的PCR 扩增第62-63 页
  · 克隆载体 TS 的鉴定第63-64 页
    · 蓝白斑筛选第63 页
    · PCR 和酶切鉴定第63-64 页
  · 表达载体pPIC9K-S 的鉴定第64 页
  · 质粒pPIC9K-S 的线性化第64-65 页
  · 酵母基因组PCR 鉴定第65 页
  · 最佳诱导表达时间的确定第65-66 页
  · S 蛋白的SDS-PAGE 检测第66 页
  · S 蛋白的Western-blotting 检测第66-67 页
  · 目的蛋白的纯化第67-69 页
    · 阴离子交换层析纯化曲线图第67 页
    · 收集管中样品的 SDS-PAGE 电泳结果第67-68 页
    · 微量超滤管纯化结果第68-69 页
  · 纯化蛋白免疫动物的抗体检测第69-71 页
    · 核酸蛋白检测 TGEV 全病毒血清第69 页
    · 检测鼠抗TGEV S 蛋白抗体的间接ELISA 方法的建立-最适抗原包被浓度的确定第69-71 页
    · 鼠抗 TGEV S 蛋白抗体效价的检测第71 页
4 讨论第71-77 页
  · 花青素第71-72 页
  · 免疫过氧化物酶试验第72-74 页
  · pGEX-N 原核表达核酸蛋白的制备第74 页
  · PET-S 原核表达蛋白的制备第74 页
  · 关于毕赤酵母表达第74-77 页
5 结论第77-78 页
参考文献第78-89 页
致谢第89-90 页
攻读学位期间发表论文情况第90 页

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